斜卧青霉(Penicillium decumbens)可有效分泌纤维素酶和半纤维素酶,降解生物质原料成为可发酵单糖,进一步生产生物乙醇。纤维素酶制剂的产量和水解效率是目前生产生物乙醇的主要瓶颈,为了提高斜卧青霉胞外产木质纤维素酶的能力,进一步增强该菌株在木质纤维素降解工程中的应用,本论文进行了以下一系列实验：1.斜卧青霉△vps::ptrA突变株的筛选。通过蛋白质同源序列比对收索到斜卧青霉VPS10序列,并设计引物。采用double-joint PCR方法构建△vps::ptrA敲除盒,通过基因同源双交换获得转化子△vps::ptrA,通过PCR交叉验证以及酶切验证,结果显示,斜卧青霉中vps10基因已被敲除,这对在斜卧青霉中研究VPS10的功能具有重要意义。2.斜卧青霉△vps::pyrG突变株的筛选。采用double-joint PCR及酶切连接方法构建△vps::pyrG敲除盒,该敲除盒主要特点是携带了上游同源臂部分重复序列,可以形成自我剪切模式。通过△pyrG::ptrA原生质体转化得到vps10缺失突变株△vps::pyrG,经过PCR交叉验证以及酶切验证,结果显示,突变株△vps::pyrG构建成功,这对同一筛选标记多次应用于斜卧青霉遗传改造具有重要意义。3.瑞氏木霉p-葡萄糖苷酶基因表达载体pbgl-hph的构建。采用double-joint PCR及酶切连接方法构建表达载体pbgl-hph,在突变株△vps::ptrA中表达瑞氏木霉p-葡萄糖苷酶蛋白,通过酶切验证,表明表达载体pbgl-hph构建成功,这对在斜卧青霉中研究VPS10的功能以及提高外源p-葡萄糖苷酶的产量有着重要意义。4.斜卧青霉新转录调控因子Bg1R对产纤维素酶的影响。根据斜卧青霉114-2在不同碳源生长条件下基因组表达谱的差异,发现新的转录调控因子BglR (PDE-01706),与产黄青霉(Penicillium chrysogenum) Pc20g04780的锌指结构蛋白具有59%同源性。通过基因同源双交换得到了Bg1R缺失突变株ΔbglR-1。对突变株ΔbglR-1的表型、营养生长、产纤维素酶活、蛋白分泌能力及发酵液pH值变化进行了研究,结果显示,Bg1R的缺失可导致突变株ΔbglR-1的β-葡萄糖苷酶活力提高40%,并使其滤纸酶活、内切葡聚糖酶及木聚糖酶活明显降低,表明转录调控因子Bg1R对于斜卧青霉纤维素酶的调控有着重要作用。