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Toll样受体3（Toll-like receptor 3,TLR3）是一种典型识别受体,它能够识别外源微生物组分,并调控机体的炎症反应和免疫应答;TLR3与TLR3的激动剂结合,可以抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡等功能;但是TLR3在癌细胞中的稳定性及TLR3参与肺癌等肿瘤发生和发展的机制尚未研究清楚。因此,本课题通过对TLR3的稳定性及其降解对肺癌细胞功能的调控进行相关研究。本课题使用基因编辑技术（CRISPR-Cas9）精确地对H1299细胞的TLR3基因进行敲除,获得稳定缺失TLR3基因的H1299细胞株。经过平板细胞克隆形成实验和细胞划痕实验,继而揭示在肺癌细胞系H1299中,TLR3基因的缺失提高H1299细胞的增殖能力,抑制了该细胞的迁移能力。使用蛋白质降解过程中关键酶抑制剂对H1299细胞株进行处理,结果初步验证抑制蛋白酶体降解酶活性能提高TLR3蛋白的稳定性。为进一步研究TLR3降解的分子机制,我们采用免疫共沉淀,过表达泛素分子（Ubiquitin,Ub）和蛋白免疫印记实验进行探究,结果表明TLR3分子与泛素分子Ub物理上相互作用并且Ub能诱导TLR3的降解,初步揭示了TLR3在H1299细胞内通过泛素-蛋白酶体途径降解。泛素连接酶E3s（ubiquitin-protein ligase）能特异地与目标底物结合,调控底物稳定性。通过免疫共沉淀实验与生物质谱分析,结果表明TLR3与Deltex-3-like（DTX3L）相互作用;并在H1299细胞中过表达DTX3L,TLR3的蛋白水平与DTX3L表达量成反比,以上结果证明了DTX3L能够诱导TLR3的降解。将构建的TLR3截短突变体转染至细胞并使用MG-132处理,分析结果得泛素化的位点分布在N1N100之间,该序列中赖氨酸位点进行突变。再将构建的TLR3的K97,K102点突变体转染至细胞,并使用MG-132处理,进行蛋白免疫实验,结果显示TLR3-K97几乎无降解;同时,TLR3点突变体的半衰期实验结果表明TLR3-K97的半衰期明显延长。为了探究TLR3的泛素化连接酶DTX3L对肺癌细胞的迁移能力的调控,我们采用细胞迁移和侵袭实验进行研究,结果显示过表达DTX3L的细胞和TLR3表达低的细胞与野生型H1299细胞相比,前两者的迁移和侵袭能力明显减弱;综上所述,本研究证明DTX3L诱导TLR3在H1299细胞中通过泛素-蛋白酶体途径降解,并且TLR3的泛素化修饰位点位于Lysine97残基;同时,通过DTX3L过表达降低了TLR3的水平,抑制了H1299细胞迁移与侵袭能力。