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目的基因甲基化在细胞的形成发育中发挥调控作用,目前关于其研究主要集中在启动子甲基化方面。雄激素受体(Androgen Receptor,AR)启动子甲基化研究以往多集中在性激素依赖性肿瘤,而在性激素非依赖性肿瘤报道很少,在白血病中更未见相关报道,本实验利用MSP方法检测白血病中AR启动子甲基化情况,揭示其异常甲基化状态,同时利用去甲基化试剂5-AzaDC处理白血病细胞,分析处理前后AR基因启动子的甲基化状态、mRNA和蛋白表达的变化,分析5-AzaDC影响基因表达的可能机制,以揭示白血病AR基因启动子甲基化变化情况与基因表达的关系,为肿瘤的形成与DNA甲基化的关系提供理论依据,从而为肿瘤的治疗提供新的方向。方法1.白血病细胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培养以及5-AzaDC对细胞株的处理。2.利用MSP检测白血病细胞株和正常人白细胞AR基因启动子的甲基化状态,分析两者的差异。3.利用MSP检测在5-AzaDC处理白血病细胞株后AR启动子CpG岛甲基化状态变化。4.运用RT-PCR检测5-AzaDC处理前后白血病细胞株AR mRNA的表达变化。5.运用免疫组化和western blot分别检测5-AzaDC处理前后AR蛋白的表达变化,同时察AR在细胞中的表达位置。6.运用MSP检测白血病患者骨髓标本AR启动子CpG岛甲基化情况,分析白血病细胞AR启动子CpG岛甲基化检测的临床诊断治疗价值。结果1.MSP检测白血病细胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat和正常人白细胞AR启动子甲基化显示:在三株白血病细胞,AR启动子CpG岛检出部分甲基化,而正常人白细胞显示未甲基化。2.5-AzaDC处理HL-60、MOLT-4、Jurkat后,AR启动子CpG岛发生去甲基化。3.白血病细胞中存在AR mRNA表达。4.白血病细胞株经5-AzaDC处理后AR mRNA表达发生变化,较处理前ARmRNA表达升高。5.白血病细胞株经5-AzaDC处理后AR蛋白表达发生变化,较处理前AR蛋白表达升高。6.利用MSP检测15例白血病患者骨髓细胞AR启动子CpG岛甲基化情况,结果在15例白血病患者骨髓标本中均检出AR基因启动子区发生甲基化,其中12例(12/15)标本呈部分甲基化状态,3例(3/15)标本呈高甲基化状态。结论1.白血病细胞株雄激素受体启动子CpG岛存在异常甲基化状态,而正常人白细胞为未甲基化状态,AR启动子甲基化可能是白血病的分子遗传改变之一。2.5-AzaDC可以使白血病细胞株AR启动子CpG岛发生去甲基化,这种作用为表观遗传学紊乱调节的治疗提供了新的方向。3.白血病细胞株经5-AzaDC处理后AR mRNA表达升高,说明去甲基化试剂5-AzaDC对AR基因的转录水平表达有一定的作用,AR基因mRNA表达的增加可能与AR启动子的去甲基化有关。4.白血病细胞株经5-AzaDC处理后AR蛋白表达存在升高,说明去甲基化试剂5-AzaDC对AR基因表达的影响也体现在翻译水平上,AR蛋白表达的增加可能与AR启动子的去甲基化有关。这为5-AzaDC在白血病中的治疗作用提供了一种理论解释。5.白血病患者骨髓标本AR启动子CpG岛同样存在甲基化现象,这种现象可能成为白血病诊断的潜在标志物。