目的:鼠疫PCR技术是1995年由中国鼠布基地引进,并在部分省区开展的分子生物学技术,它是一种利用鼠疫耶尔森氏菌特定的引物对特异的DNA片断进行体外扩增的检验方法.目的基因往往选择鼠疫耶尔森氏菌特异的质粒.但是鼠疫耶尔森氏菌在自然条件下容易发生变异而变成"非典型菌",这时通过一对或两对引物PCR的方法检测不到菌.本文利用现在公认的三对质粒基因和一对染色体基因作为靶基因来检测鼠疫耶尔森氏菌,全部实验在4h内全部完成,克服了"四步检验法"必须在24-48h才能完成所带来诊断困难.从而探索一种鼠疫的快速诊断方法.方法: 1所用菌株是我省自19世纪50年代以来分离于河北鼠疫自然疫源地的菌株,菌株保存于真空冻干管中,颜色为淡白色.首先对菌株复活,28℃培养48h,再经过1-2代使菌株复活.2我们对鼠疫耶尔森氏菌的本底信息进行鉴定,包括糖酵解试验、生化试验和毒力因子的鉴定.糖酵解试验用液体汤管法,生化试验用固体试管法,毒力因子的鉴定采用文献所介绍的方法.3动物模型选择河北省鼠疫自然疫源地主要传播媒介突病蚤蒙冀亚种蚤,首先在疫源地收集新鲜的鼠巢进行羽化,分类鉴定后,把突病蚤蒙冀亚种蚤单独饲养用于实验材料.首先在控制条件下,叮咬感染鼠疫耶尔森氏菌的小白鼠,然后把小白鼠取出单只拣蚤.材料研碎分成2份,一份用于四步检验、一份用于鼠疫PCR.4对引物的合成通过internet从DDBJ核酸网检索并设计.目的基因选择编码FI抗原的质粒caf1基因、编码血浆凝固酶及胞浆素原活化因子的质粒pla基因、编码与色素沉着有关的hms基因以及染色体inv基因.PCR反应采取标准的反应体系加入,然后按95℃5min,再按95℃1min、54℃1min、72℃1min30次循环,最后72℃5min.反应物经0.8％琼脂糖凝胶电泳30min,再在含0.5％的溴化已啶的容器中染色30min,分析、成像.结论:4对引物鼠疫PCR法具有快速、特异、敏感等优点,可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查.