目的:建立小驳骨饮片的质量标准,为鉴别小驳骨饮片的真伪和质量的优劣,保证临床用药安全、有效、稳定、均一、可控提供科学依据;建立小驳骨饮片红外光谱鉴别方法及红外光谱的共有模式,深入研究小驳骨饮片HPLC指纹图谱,构建指纹图谱库,为小驳骨质量控制与评价引入新的技术方法。方法:1按照国家药品质量标准制定鉴别方法,对小驳骨饮片进行性状特征、粉末显微特征及薄层色谱特征进行鉴别。2按照《中国药典》2010版一部附录Ⅸ H、Ⅸ K的方法,进行水分、总灰分及酸不溶性灰分检查项目的测定。3按照《中国药典》2010版一部附录X A的方法,对浸出物的含量进行测定;按照《中国药典》2010版一部附录VA紫外分光光度法,以芦丁为对照品,对小驳骨饮片总黄酮的含量进行测定。4运用红外光谱在4000～400cm-1范围内对小驳骨饮片进行扫描,应用spss17.0数据分析软件对所有的样品进行聚类分析,建立小驳骨饮片红外光谱鉴别方法。5采用HPLC法对小驳骨饮片进行指纹图谱研究。结果:1质量研究1.1性状鉴别小驳骨饮片切成短段、不规则块片,呈圆柱形,有的分枝,直径0.2～3cm,表面黄绿色、淡绿色或黄褐色,有稀疏的黄色小皮孔,节膨大;小枝微具四棱线,节膨大,略带紫色,多分枝;短段者2～6cm,不规则的片厚约至2cm;质脆,易折断,断面黄白色,纤维性,中空有髓。叶对生,具短柄;叶厚纸质,易破碎,完整者展开呈颊披针形至条状披针形,长4～14cm,宽1～2cm,先端渐尖,基部楔形,全缘,叶面淡绿色至绿褐色,叶背呈灰绿色,叶脉略带紫色。气微,味微辛、酸。1.2粉末显微鉴别小驳骨粉末为黄绿色至黄褐色。石细胞众多,棕黄色、鲜黄色或绿黄色,呈类圆形、类三角形、长方形或类方形,壁厚薄不均,层纹明显,有的胞腔内含黄色物。腺鳞头部扁球形,4个细胞,具短柄单细胞,有的内含颗粒状黄色物。气孔为不等式,副卫细胞2～3个。非腺毛2～4细胞,平直或先端弯曲,较长。导管主为具缘纹孔导管,也有网纹、梯纹及螺纹导管,具缘纹孔椭圆形,排列紧密。薄壁细胞中含有草酸钙方晶。1.3薄层鉴别取药材粗粉2g,加乙醇50mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1mL使溶解,作为样品溶液,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各5 uL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～900℃)-乙酸乙酯(8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105°℃加热至斑点显色。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。1.4检查项目测定小驳骨饮片10个测试样品水分含量最高为11.96%,最低为9.04%,平均值为10.76%,最高与最低水分含量相差2.92%;总灰分含量最高为16.70%,最低为4.72%,平均值为9.23%,最高与最低总灰分量相差11.98%。酸不溶性灰分量最高为1.31%,最低为0.32%,平均值为0.57%,最高与最低酸不溶性灰分量相差0.99%。1.5水溶性浸出物测定小驳骨饮片10个测试样品中水溶性浸出物(热浸法)量最高为27.41%,最低为10.64%,平均值为17.90%,最高与最低水溶性浸出物量相差16.77%。1.6总黄酮含量测定小驳骨饮片12个测试样品中总黄酮含量最高为7.60 mg/g,最低为2.72 mg/g,平均值为4.67 mg/g,最高与最低总黄酮含量相差4.88 mg/g。2红外光谱研究将12批小驳骨测试样品压片,在波数4000～400cm-1范围内进行扫描,以空白KBr片采集背景,扣除H20和C02的干扰,得到样品的红外光谱。通过对小驳骨红外光谱分析,初步建立了小驳骨饮片图谱库,确立10个共有峰,分别为3400 em-1、2924 cm-1、1642 cm-1、1426 cm-1 1378 cm-1、1324 cm-1、1242 cm-1、1152 cm-1、1051cm-1、769 cm-1,并对共有峰进行归属;对12批小驳骨饮片的红外光谱,应用spss17.0数据分析软件进行聚类分析,12批样品一共分为5类,3、8、1、7、4、5、9号样品为一类;11、12号样品为一类;2号样品为一类;10号样品为一类;6号样品为一类。3 HPLC指纹图谱研究以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.3%冰醋酸溶液为流动相,进行梯度洗脱;检测波长为245nm;按照高效液相色谱法(《中国药典》2010版一部附录Ⅵ D测定。以槲皮素为内标物,测得小驳骨饮片12个样品的HPLC指纹图谱有11个共有峰,12号峰为内标物,稳定性试验表明,样品在24h内稳定。初步建立了小驳骨饮片HPLC指纹图谱方法,12个样品的HPLC指纹图谱相似度依次是0.915、0.913、0.984、0.988、0.981、0.521、0.789、0.738、0.937、0.945、0.957、0.926,样品 6～8 的相识度低于80%,其他样品的相似度均在90%以上;其峰形相似程度较高,确定11个共有峰。结论:1通过研究制定了小驳骨饮片的性状、粉末显微鉴别及薄层鉴别的质量控制方法。2根据实验结果,初步拟定:小驳骨饮片水分不得过13.0%;总灰分不得过11.0%;酸不溶性灰分不得过2.0%;水溶性浸出物含量不得少于8.0%;按干燥品计算,含总黄酮以芦丁(C27H1O16)计不得少于0.20%。3初步建立了小驳骨饮片红外光谱图库,共有10个共有峰,其鉴别方法可行,小驳骨饮片根据红外光谱可分为5类,市面流通商品多数是第一类。4初步建立小驳骨饮片的HPLC指纹图谱,所测样品相似度分析基本大于0.90,确定11个共有峰,利用其共有模式初步建立小驳骨饮片特征指纹图谱,有助于小驳骨饮片的生产向现代化、标准化和国际化方向发展。