黄酮类化合物抗氧化能力的比较及其对肠道菌群的调节作用

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黄酮为一大类植物多酚化合物的总称,广泛存在于蔬菜、水果、茶叶等多种天然植物中,具有抗氧化、抗过敏、抑制肿瘤及防癌等多种生物学活性。本研究以表儿茶素(Epicatechin,EC)、表没食子儿茶素(Epilgallocatechin,EGC)、原花青素B2(Procyanidin B2,P)、槲皮素(Quercetin,Q)、二氢槲皮素(Taxifolin,T)和芦丁(Rutin,R)为研究对象,基于六种黄酮类化合物相同摩尔浓度数,通过体内外抗氧化实验对其抗氧化能力进行评价;同时采用高通量测序法分析衰老小鼠肠道菌群的变化及原花青素B2对衰老小鼠肠道微生态的影响。主要研究结果如下:(1)在纯化学体系中测定样品EC,EGC,P,Q,T和R对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的清除能力,实验结果显示6种黄酮类化合物体外抗氧化能力:EGC>EC(1~2倍),P>EC(2~4倍),Q≥T,Q>R(1~3倍),且随着浓度的增大其抗氧化效果不断的增强,浓度和清除效率存在线性相关关系。即6种黄酮类化合物的体外抗自由基强度顺序为P>EGC>EC,Q≥T>R。(2)通过构建D-半乳糖衰老小鼠模型,以小鼠脏器指数、肝脏病理切片、血清中SOD、CAT、GSH-PX、T-AOC的活性和MDA、NO的含量、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的水平以及SOD1、SOD2、CAT、GSH1在mRNA和蛋白水平上的表达为指标,综合评价6种黄酮类化合物对D-半乳糖诱导衰老小鼠模型的抗氧化效果。结果表明:灌胃EC、EGC、P、Q、T和R可在一定程度上缓解小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏指数的降低和肝脏组织的病理变化;显著提高小鼠血清中SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC的活性,降低MDA的含量和NO的浓度;抑制小鼠体内TNF-α、IL-1β和IL-6细胞炎症因子的分泌,并促进小鼠血清中抗炎因子IL-10的分泌;在mRNA和蛋白水平上显著提高SOD1、SOD2、CAT和GSH1的表达量,能够一定程度的改善小鼠的抗氧化能力,对小鼠机体有显著的保护作用。其作用强度为P>EGC>EC,Q≥T>R。(3)上述6种黄酮类化合物的体内外抗氧化活性与连苯三酚、二聚体、C2,C3位双键和C-3位糖基结构密切相关。在非生物系统(纯化学反应系统)中含有连苯三酚、二聚体的表没食子儿茶素、原花青素B2与表儿茶素相比较,它们的抗氧化作用依次增强;含有C2,C3位双键的槲皮素与二氢槲皮素相比较,C2,C3位双键对提高黄酮类化合物的抗氧化活性作用甚微或是无效;含有C-3位糖基化的芦丁与槲皮素相比较,减弱其抗自由的作用;在生物体系中,其规律也大体一致。结果表明:连苯三酚较邻苯二酚能够一定程度上增强黄酮类化合物的抗氧化活性;二聚体能够显著增强黄酮类化合物的抗氧化能力;C2,C3位双键对黄酮类化合物的抗氧化活性无显著影响;C-3位糖基化能明显减弱黄酮类化合物的抗氧化活性。(4)通过Miseq高通量测序法分析衰老小鼠肠道菌群的变化及原花青素B2对其影响,研究表明:衰老小鼠肠道菌群在门水平上,硬壁菌门占比显著降低、拟杆菌门的含量显著增加,硬壁菌门/拟杆菌门的比值明显降低;在属水平最为显著的变化是乳杆菌属的明显减少。经原花青素B2处理的衰老模型小鼠,其肠道中硬壁菌门/拟杆菌门的比值和乳杆菌属的含量均显著增加,从而起到一定的改善肠道健康的作用。
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