目的：　　运用蛋白质组学技术及生物信息学分析方法，筛选并鉴定针刺治疗失眠的特异性差异表达蛋白，探讨失眠及针刺治疗失眠过程可能的调控机制和生物信息途径，筛选出失眠潜在治疗靶点，为临床针刺治疗失眠提供可靠依据。　　方法：　　本研究主要分为三个部分：第一部分，针灸治疗失眠临床疗效的Meta分析；第二部分，基于iTRAQ（同位素标记相对和绝对定量）技术的针刺治疗失眠大鼠脑组织相关蛋白组学分析；第三部分，Western blot验证差异蛋白卷曲螺旋C2结构域蛋白1A（CC2D1A）和PH结构域蛋白5（FGD5）的表达。　　主要方法如下：　　1.通过计算机、人工，对中文期刊全文数据库（CNKI）、维普期刊数据库（维普VIP）、万方全文数据库(CSPD)中关于针灸治疗失眠的临床随机对照试验文献进行检索，筛选符合要求的文献，按照循证医学系统评价方法，使用改良后Jadad评分量表对纳入研究的文献质量进行评价，运用RevMan5.3.5软件进行系统分析。　　2.将50只雄性SD大鼠随机分为5组，分别为空白组、捆绑组、模型组、空白针刺组、模型针刺组。采用对氯苯丙氨酸（PCPA）法制作大鼠失眠模型，并通过戊巴比妥钠睡眠实验对失眠模型进行评价。空白针刺组和模型针刺组大鼠选取五脏背俞穴（“肺俞”、“心俞”、“肝俞”、“脾俞”、“肾俞”）进行针刺干预。运用iTRAQ技术分别对5组混合样品蛋白质进行肽段标记，液相色谱——串联质谱（LC-MS）进行相关蛋白质鉴定，通过生物学分析筛选出失眠及针刺治疗失眠的差异表达蛋白，探讨失眠病理及针刺治疗失眠可能的调控机制和信号传导途径。　　3.运用 Western blot技术对候选差异蛋白CC2D1A、FGD5的表达进行验证。运用BCA法测定5组样品蛋白浓度，通过12%SDS-PAGE电泳、转膜、免疫杂交、化学发光的方法检测两种差异蛋白的表达情况，数据处理用SPSS18.0统计软件，以p＜0.05认为差异具有统计学意义。证明CC2D1A、FGD5确实在针刺治疗失眠的生物学途径中发挥了重要作用。　　结果：　　1.纳入符合要求的文献共10篇，失眠病例共计757例。Meta分析结果显示，针灸疗法与常规西药相比，对睡眠质量的影响方面存在统计学差异，针灸疗法优于常规西药[MD=-1.14,95%CI(-2.05,-0.23), p＜0.05]。针灸与常规西药在治疗失眠的总有效率方面的差异显著，且针灸疗效更好[Z=6.14,OR=5.24,95%CI(3.09,8.89), p＜0.01]。　　2.造模后治疗前，模型组、模型针刺组大鼠的生存状态发生改变，表现为精神萎靡，反应灵敏度下降，攻击性强，进食量减少，饮水量增多，毛发光泽度降低等；与空白组相比，睡眠潜伏期延长、睡眠时间缩短（p＜0.05）。针刺治疗后，与模型组相比，模型针刺组大鼠白天活动减少，精神萎靡状态有所改善，攻击性降低，进食量增多，饮水量有所减少，且空白组、空白针刺组、模型针刺组大鼠体重增加明显（p＜0.05），空白针刺组和模型针刺组大鼠的睡眠潜伏期缩短，睡眠时间延长（p＜0.05）。　　3. iTRAQ标记的5组大鼠脑组织蛋白， LC-MS共鉴定出蛋白质组3383个，得到肽段16641个。按照定量标准Ratio<0.83或Ratio>1.2，空白组-模型组有163个，模型组表达上调73个，下调86个，其中显著差异的蛋白质有金属蛋白酶抑制剂4（TIMP4）、二氢嘧啶酶相关蛋白2（DPYSL2）等；模型针刺组-空白组202个，模型针刺组上调137个，下调64个；模型组-模型针刺组117个，模型针刺组上调82个，下调35个；捆绑组-模型针刺组244个，模型针刺组表达上调88个，下调150个。维恩图分析得到34个差异蛋白，根据功能筛选出4个可能与针刺治疗失眠相关差异蛋白，CC2D1A、类脊髓小脑共济失调蛋白2（ATXN2L）、FGD5、芳香烃受体抑制因子（AhRR）。其中CC2D1A、ATXN2L在模型组表达显著上调，针刺治疗后表达下调；FGD5、AhRR在模型组表达下调或未表达，针刺治疗后表达上调。生物信息学分析提示参与失眠过程的差异蛋白主要具有结合作用、催化作用、酶活性调控作用等；参与的生物过程主要有细胞过程、生物调节、色素形成、代谢过程等。针刺治疗失眠效应的调控蛋白的主要分子功能有催化作用、结合作用、酶活性调控等。主要参与的生物学过程有细胞过程、建立蛋白质定位、转录调控、细胞内信号级联等。　　4. Western blot验证结果显示：与空白组相比，捆绑组CC2D1A的表达水平无统计学意义（p＞0.05），模型组 CC2D1A表达量明显增高（p＜0.01）；与模型组比较，模型针刺组CC2D1A表达水平下调（p＜0.05）；与空白针刺组比较，模型针刺组CC2D1A表达量差异具有统计学意义（p＜0.05）。　　与空白组比较，捆绑组、空白针刺组FGD5表达量的差异没有统计学意义（p＞0.05），模型组 FGD5表达下调（p＜0.05）；与模型组比较，空白针刺组、模型针刺组FGD5表达上调（p＜0.05）；空白针刺组、模型针刺组也有显著差异（p＜0.05）。Western blot的结果与质谱分析结果一致。　　结论　　1.针灸治疗失眠的随机对照试验研究对随机分配方法、失眠评定方法、组间基线等描述较之前更为详细，疗效评定具有多方位性。针灸治疗失眠的临床疗效显著，在改善睡眠质量和总有效率方面均优于常规西药。　　2.针刺治疗可改善失眠大鼠的生存状态，增加失眠大鼠体重，缩短睡眠潜伏期，延长睡眠时间。　　3.失眠过程中的差异蛋白主要功能涉及结合作用、催化作用和酶活性调控作用等。细胞过程、生物调节和代谢过程是参与失眠生理病理的主要生物过程，主要的差异蛋白有TIMP4、DPYSL2等。　　4.针刺治疗失眠效应的蛋白主要参与细胞过程、建立蛋白质定位、转录调控、细胞内信号级联等过程。针刺通过下调CC2D1A、ATXN2L表达水平，上调FGD5、AhRR表达水平发挥生物学效应。　　5. iTRAQ技术能够用于研究针灸治疗疾病的生物学过程，揭示这一复杂过程中的分子生物基础，有利于推动针灸疗效机制研究的发展。