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结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(mycobacterium–tuberculosis,MTB)引起的传染性疾病,结核病的临床诊断方法主要分为三大类:细菌学检查、分子生物学检查和免疫学检查,其中免疫学检查以准确性高、操作简便而备受关注。近年来,免疫学检查中γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(Interferon Gamma ReleaseAssay, IGRA)因高灵敏度和特异性而引起了人们的兴趣。IGRA基于酶联免疫斑点试验(ELISPOT)最早被广泛应用,世界卫生组织(WHO)推荐两种结核病诊断试剂QFT-G试剂盒和T-SPOT.TB试剂盒均基于ELISPOT。IGRA是采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法定量检测全血在结核分枝杆菌特异性抗原刺激下释放IFN-γ的水平,用于诊断结核分枝杆菌感染以及结核病。其检测原理是采用夹心法原理进行检测,衡量特异性抗原介导的细胞免疫反应强度。通过结核分枝杆菌特异性抗原刺激结核分枝杆菌感染者特异性T淋巴细胞并使其增殖,释放IFN-γ。用IFN-γ抗体包被磁微粒,辣根过氧化物酶标记IFN-γ抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-抗体复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与IFN-γ的含量成正比。本研究基于IGRA建立一种化学发光方法,并将其应用于结核病诊断。化学发光方法通过磁微粒混悬液制备,酶结合物制备,校准品制备,反应体系优化,正常参考值确定,稳定性研究建立而成。该方法应用于结核病诊断的研究主要通过与临床确诊信息对比,考核化学发光方法应用于结核病诊断的灵敏度、特异性和准确性指标,以OxfordImmunotec Ltd生产的T-SPOT.TB试剂盒作对照,考核化学发光方法应用于结核病诊断与T-SPOT.TB试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总符合率。建立的化学发光方法将检测时间缩短为30分钟,该化学发光方法应用于结核病诊断中,与临床确诊结果对比,灵敏度为86.19%(69/81),特异性为84.26%(589/699),准确性为84.36%(658/780)。以T-SPOT.TB试剂盒作标杆,该化学发光方法应用于结核病诊断与T-SPOT.TB试剂盒的阳性符合率为85.88%(225/262),阴性符合率为81.44%(215/264),总符合率为83.65%(440/526)。本研究通过建立化学发光方法应用于结核病的诊断,缩短了检测时间,提高了检测线性范围,更加灵敏和特异,并且对环境没有污染。为今后结核病诊断使用化学发光方法奠定基础。