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巴贝西虫病(Babesiosis)是哺乳动物通过碑虫叮咬或输血感染巴贝西虫(Babesia)而引起的一种人畜共患血液原虫病。目前已发现的巴贝西虫大约有数百种,而其中明确能够感染人的种类很少。免疫机能正常的个体感染巴贝西虫之后通常无明显症状,而对于脾切除手术者、肝肾功能不全者以及老年人等免疫机能较低的人群来说,感染巴贝西虫后常引起严重的症状甚至死亡。目前为止,巴贝西虫感染人的病例每年都在增加,已对人类的健康构成威胁。因此,加强对巴贝西虫感染的检测,对于巴贝西虫病的防控有着重要的意义。根据目前的研究报道,人对田鼠巴贝西虫(Babesiamicroti,B.microti)最易感。B.microti的毒性相对较弱,感染人类之后可通过免疫逃避机制来避开机体的免疫应答,治疗时也没有特效药,并且治疗后可能复发。现阶段我国对田鼠巴贝西虫的检测技术主要有形态学检测、免疫学检测以及分子生物学检测,但主要依赖于形态学检测,分子生物学与免疫学检测方面的研究仍然比较少。目前国内尚无针对田鼠巴贝西虫病的商品化试剂,但近年来研究发现了一些免疫原性良好、可用作诊断抗原的靶标抗原,其中,分泌抗原1(Baesia microti secreted antigen 1,BmSA1)的检测效果较好,敏感性与特异性都较稳定,是较好的诊断靶标抗原。经研究发现,BmSA1全长蛋白含有信号肽和跨膜区,不利于重组表达和纯化,本研究使用生物学软件对该蛋白进行了信号肽和跨膜区预测,构建并表达了带有His标签的截短型BmSA1重组蛋白(tBmSA1),并且实现了高效的可溶性表达,通过间接ELISA法与免疫印迹法验证了 tBmSA1具有较高的抗原特异性。利用tBmSAI构建了双抗原夹心ELISA检测方法:将该蛋白大量表达并纯化之后,与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联,在双抗原夹心ELISA方法中作为酶标抗原使用,将中国农业科学院上海兽医研究所提供的带有GST标签的截短型BmSA1重组蛋白(tBmSAI-GST)作为包被蛋白,通过对实验方法的优化与对比之后,最终确定了各项实验条件:tBmSAl-GST的包被浓度为6μg/mL,血清稀释度为1:10,包被液为碳酸盐溶液(CBS),包被条件为4℃过夜,封闭液为5%的脱脂奶粉,封闭条件为4℃过夜,血清的反应时间为1h,酶标抗原的稀释度为1:1000,酶标抗原的作用时间为1h,底物作用时间为10min。条件优化后对其进行了各方面的评估,结果均较好。对84份羊血清以及1117份人血清进行了临床初步检测,在其中检出了 7例阳性血清,其中羊血清1例,人血清6例。并通过免疫印迹法对这些阳性血清进行了验证,均显示特异性条带。该体系与日本血吸虫、发热伴血小板减少综合征病毒、刚地弓形虫无交叉。故本研究所建立是一种高特异性,高敏感性的检测田鼠巴贝西虫感染的免疫诊断方法。