背景实验研究及流行病学调查研究表明,高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)是心血管疾病发生发展的一个独立及重要的危险因素。在HHcy致心血管疾病的机制中,Hcy导致血管内皮细胞损伤是其中一个重要的因素。研究表明P66Shc甲基化状态的改变,可引起血管内皮细胞损伤。Hcy能否通过改变P66Shc甲基化状态,引起血管内皮细胞损伤,研究报导较少。本实验研究以实验室培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,观察Hcy对细胞P66Shc DNA甲基化状态的影响及DNA甲基化状态改变后对血管内皮细胞凋亡的影响,为DNA甲基化介导Hcy致血管内皮损伤提供新的理论依据。目的研究同型半胱氨酸致细胞氧化应激作用,探究同型半胱氨酸致血管内皮损伤在表观遗传学修饰方面的机制。方法1.培养人脐静脉内皮细胞,加入不同浓度Hcy诱导人脐静脉内皮细胞损伤,检测P66Shc、active-Caspase3的蛋白表达水平;2.应用甲基化特异性PCR检测诱导后P66Shc的DNA甲基化状态改变;3.加入不同浓度甲基化抑制剂5-氮杂胞嘧啶核苷(5-Azacytidine)并检测P66Shc、active-Caspase3的蛋白表达水平。结果1.Hcy诱导人脐静脉内皮细胞中P66Shc和active-Caspase3蛋白表达增加;2.Hcy引起P66Shc的DNA低甲基化;3.加入甲基化抑制剂5-Azacytidine可以下调P66Shc和active-Caspase3蛋白表达。结论Hcy可以通过降低P66Shc的DNA甲基化状态,引起血管内皮细胞凋亡导致血管内皮损伤。