论文部分内容阅读
多胺是从微生物到高等生物所有生物体内广泛存在的小分子碱性脂肪族化合物,代表性的物质有腐胺(PUT)、亚精胺(SPD)、精胺(SPM)。多胺在生物体内起着重要的作用,直接参与生物体内的多种生理活动,是生物体生长和细胞代谢所必需的痕量活性物质,生物体内多胺的含量与组织的病变、生长发育的水平有直接的关系。因此开发选择性好、灵敏度高、经济实用的分析多胺的方法一直是人们关注和研究的热点之一。反相高效液相色谱柱前衍生荧光检测法是目前分析生物体内多胺的有效方法之一,但大部分衍生试剂在实际应用中都存在着不同程度的缺陷,比如因分子质量过大,使分离效果降低;因衍生物的疏水性太强,为了得到合适的保留时间,需要增加流动相中的有机溶剂的比例等。本文为了开发用于HPLC法分析生物胺的荧光衍生试剂,设计、合成了几种分子质量较小、疏水性较低的化合物,并测定了光谱性质,探讨了它们与多胺类化合物的反应性能以及衍生物的HPLC行为。荧光衍生试剂的初始原料选择2-氨基烟酸、水杨酸、邻氨基苯甲酸和N-甲基氨基苯甲酸。其中邻氨基苯甲酸和N-甲基氨基苯甲酸直接把市售的无水物邻氨基苯甲酸酐和N-甲基氨基苯甲酸酐作为为荧光试剂,而2-氨基烟酸和水杨酸则合成对应的活性酯作为荧光衍生试剂。并选择己胺和二丙胺,探讨了四种荧光衍生试剂与伯胺和仲胺的反应性以及衍生物的光谱性质。结果表明,己胺衍生物显示出较强的荧光,二丙胺衍生物几乎没有荧光。反应性能方面,在四种荧光试剂中邻氨基苯甲酸酐的反应性最强,在100℃下,反应4 h时几乎定量完成。选择性能较好的邻氨基苯甲酸酐为荧光衍生试剂,柱前衍生HPLC法分析了腐胺、亚精胺及精胺混合溶液中的多胺。结果衍生反应在100℃下,反应5.5 h时衍生物的生成量达到最大。在色谱分析条件为流动相:50 mmol?L?1磷酸二氢钠:乙腈= 3 : 2,激发波长λex=310 nm,发射波长λem=410 nm,流速:1.0 mL?mim?1,柱温为37℃时,得到了分离效果好和保留时间适合的色谱图。另外,还合成了八种邻氨基苯甲酸酐类其它化合物,并研究了八种衍生物的光谱性质。选择荧光量子效率较高的两种化合物与己二胺反应,合成了衍生物标准品,并测定了荧光光谱。结果表明,衍生物显示很强的荧光强度,有望应用于HPLC荧光检测多胺化合物的衍生试剂。