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背景:肺癌是世界范围内发病率最高的癌症,年新增病例约160万例,死亡138万例。肺癌包括非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）,其中NSCLC约为所有病例的80-85%。尽管越来越多的治疗方法如手术、化疗、放疗和靶向治疗等已应用于临床,但NSCLC的5年总生存率仍不超过20%。NSCLC死亡率高的重要原因是缺少有效早期诊断技术方法。NSCLC的临床表现和预后主要取决于其分期,早期治疗效果更显著。但由于NSCLC缺少有效的早期诊断方法,多在晚期出现局部或远处转移时才被确诊,因此在提高NSCLC生存率方面仍存在许多困难。研究新的预后相关因子作为NSCLC的生物标志物可能是推动NSCLC早期诊断技术进步的重要动力。先前的报道已经表明TRIM37在肝癌、胰腺癌、结肠癌和乳腺癌等多种肿瘤中表达水平增加,并与肿瘤的预后相关,但在肺癌TRIM37的作用还不清楚。在本研究中我们从GEO和TCGA数据库中下载了相关研究结果并结合我们收集的临床标本分析了 TRIM37在NSCLC癌及邻近正常组织中的表达水平,以及和预后的相关性。进一步在肺癌细胞中干扰和过表达TRIM37观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,再使用Akt抑制剂进·步分析Akt信号与TRIM37的关系,明确TRIM37在肺癌中的功能及相应的信号通路。第一部分 TRIM37在肺癌中的表达及与预后的相关性分析目的:调查TRIM37在NSCLC患者癌及正常组织中的表达水平,以及和预后的关系。方法:从 TCGA 数据库（https://cancergenome.nih.gov/）下载了 1 1 45 例 NSCLC基因表达检测结果和对应临床数据,使用X-tile方法分成TRIM37高和低表达组,利用Kaplan-Meier方法和log-rank test进行生存分析。从GEO数据库中收集了 7组数据（GSE27262、GSE30219、GSE31210、GSE33532、GSE30219、GSE7670和GSE10072）分析TRIM37表达水平与临床病理特征的相关性,以及在肺癌诊断中的价值。使用在线工具 KM-Plotter（http://www.kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=lung）分析TRIM37表达水平与NSCLC患者生存期的关系。采集苏州大学附属第一医院2012年1月至2013年1月期间标本库中肺腺癌（ADC）及对应的邻近正常组织石蜡组织各95例用于免疫组织化学检测（IHC）;此外,采集2016年8月至2017年3月新鲜肺腺癌及对应的邻近正常组织各30例,标本置于液氮中保存,用于提取RNA及Real-time PCR检测。利用Kaplan-Meier法和log-rank test分析肺癌TRIM37的表达水平与生存期的关系。结果:分析TCGA数据发现TRIM37在腺癌（ADC）和鳞癌（SSC）中表达水平均高于邻近正常组织;生存分析显示在ADC中TRIM37高表达与生存期降低显著相关,在SSC中TRIM37表达水平对患者生存期无显著影响。利用KM-Potter工具分析的结果显示在所有NSCLC患者中TRIM37高、低表达组的存活时间无显著差异,SCC患者TRIM37的表达与存活时间无显著相关性,但在ADC中TRIM37高表达患者的生存时间显著降低;在吸烟的NSCLC患者中TRIM37高、低表达组的存活时间无显著差异,而在不吸烟的NSCLC患者中TRIM37高表达患者的生存期明显减少。分析GEO数据可见TRIM37的表达水平增加与ADC的TNM分期以及肿瘤体积显著相关。单变量和多变量检验表明,TRIM37可能是ADC患者独立的预后因素,ROC分析显示TRIM37有显著的诊断意义。本研究纳入的95例ADC患者男女比例基本均衡,超过60%的患者为Stage Ⅰ-Ⅱ,不吸烟的患者超过55%;Real-time PCR和IHC均显示癌组织中TRIM37的表达水平显著高于邻近正常组织,且TRIM37的表达量增加与生存期减少相关。结论:TRIM37在肺癌组织中的表达量明显高于邻近正常组织,TRIM37高表达与肺癌患者生存期减少有相关性。TRIM37的表达水平增加与ADC的TNM分期以及肿瘤大小有关,也是ADC独立的预后相关因素。TRIM37作为ADC的诊断指标具有很高的特异性和敏感性,可能是ADC潜在的预后和诊断标记分子。第二部分 TRIM37靶向作用于AKT影响肺癌的增殖、侵袭和转移目的:探讨TRIM37在肺癌细胞增殖、侵袭和转移过程中的生物学作用,以及可能的信号通路。方法:通过Real-time PCR、Western-blot和IHC分析癌组织、邻近正常组织以及肺癌细胞株H292、H358、H1299、A549、H1975和人类支气管上皮细胞16HBE中TRIM37的表达水平。包装TRIM37干扰和过表达的慢病毒,感染不同肺癌细胞,改变其中TRIM37的表达水平。通过CCK-8试剂盒分析TRIM37表达水平变化对不同肺癌细胞增殖的作用,采用Annexin V-FTTC/PI法观察TRIM37表达水平变化对不同肺癌细胞凋亡水平的影响,TRANSWELL法分析TRIM37表达水平变化对不同肺癌细胞侵袭和转移的影响。通过Real-time PCR和Western blot分析TRIM37表达水平对肺癌细胞中Bcl2、Bax、Akt以及p-Akt表达水平的影响。再使用P13K/Akt抑制剂LY294002处理相应细胞,进一步分析Akt信号通路与TRIM37的关系,明确TRIM37在肺癌发生发展中的作用及可能的信号通路。随后我们分别将对照及TRIM37干扰的H358细胞接种至裸鼠皮下,观察TRIM37对H358细胞体内增值的影响。结果:Real-time PCR和Western blot均显示在癌组织中TRIM37 mRNA和蛋白的表达量均显著升高,也表明TRIM37蛋白在肿瘤组织中的表达量上调。与16HBE相比,TRIM37的mRNA和蛋白表达量在肺癌细胞株中显著增加,尤其在H292和H358中。而H1299与H292、H358、A549、H1975相比,TRIM37的表达量相对较低。因此,选择了 H292、H358和H1299细胞进行后续实验研究。在H292和H358中,干扰TRIM37后在24h、48h和72h时细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显低于对照组,凋亡水平显著高于siNC组。在TRIM37表达下调的细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达也明显下调,而BAX mRNA和蛋白表达明显增加。对照组和TRIM37干扰组的Akt水平均无显著差异,但TRIM37干扰组中p-Akt蛋白水平降低。在H1299中过表达TRIM37能够促进细胞的增殖、侵袭和转移,但再使用PI3K/Akt抑制剂LY294002后细胞的增殖、侵袭和转移能力显著下降。过表达TRIM37能够上调p-Akt和Bcl2的表达,抑制Bax的表达,而P13K/Akt抑制剂LY294002能够抑制p-Akt和Bcl2的表达,促进Bax的表达。体内实验的结果表明抑制TRIM37的表达后肿瘤的增殖能力明显下降,瘤块体积和重量明显减少。结论:在肺癌细胞中TRIM37可通过激活Akt信号通路促进Bcl2的表达,下调Bax的表达,导致肺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力增加。