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目的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是老年人群中心视力丧失的重要原因。其干性亚型所占比例高且目前仍未有有效治疗方式。玻璃膜疣(drusen)是其“Clinical hallmark”。β淀粉样蛋白(amyloid Aβ)是drusen重要组成成分,其在AMD中代谢异常机制未知。课题组前期Meta分析结果显示AMD患者血同型半胱氨酸含量升高,提示DNA甲基化异常可能参与了AMD的发生发展。本研究在建立A2E介导的光氧化应激(A2E-meadiated photooxidation,AMPO)模型的基础上探索视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞β淀粉样蛋白表达增高的表观遗传机制。材料与方法采用MTS法检测AMPO模型及对照组中不同浓度A2E及造模后不同时间点ARPE-19细胞的细胞活力。采用流式细胞仪技术检测RPE细胞内ROS水平(DHE法)。采用Elisa试剂盒检测ARPE-19细胞上清Aβ1-40及Aβ1-42的含量。采用Real-time PCR以及Western blot技术检测Aβ生成相关蛋白APP,β-,γ-裂解酶APP、BACE1、PS1以及表观遗传调控酶系DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT),甲基化结合蛋白MECP2及组蛋白去乙酰化酶HDAC1 m RNA及蛋白的表达含量。采用Maldi-Tof MS技术对BACE1基因启动子区域397个bp长度(-388至2)位点进行甲基化测序。结果MTS结果显示,AMPO模型中随着时间的延长,细胞活力逐渐降低(P<0.05)。6h时,随着A2E浓度的增加(6.25μM,12.5μM,25μM,50μM)细胞活力逐渐降低(P<0.05)。且随着A2E浓度增加,DHE探针荧光强度在阈值内的比例比增高,提示细胞内ROS水平上升,与对照组相比均有明显差异(P<0.05)。Elisa结果显示细胞上清中Aβ1-40及Aβ1-42的含量较对照组均有明显升高(P<0.05),且抗氧化剂NAC(20m M)能抑制光氧化应激后产生的Aβ1-40及Aβ1-42分泌增加(P<0.05)。造模组BACE1 m RNA及蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而APP及PS1 m RNA表达水平未见明显变化(P>0.05)。甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的含量较对照组均有明显的下降(P<0.05)。Maldi-Tof结果显示造模后BACE1基因启动子区域397个bp长度的区域(-388至2)位点13,14-15,16-18的甲基化程度下降(P<0.05),而其余位点甲基化程度无显著差异。结论在AMPO模型中,光氧化应激引起甲基转移酶表达减少,BACE1基因启动子特异性位点去甲基化,转录增强,β裂解效率增高,Aβ生成增多。提示了AMPO模型中表观遗传机制调控了RPE细胞分泌Aβ增多。