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目的:程序性死亡受体1(programmed death 1;PD-1)与其配体PD-L1(programmed cell death-Ligand 1)组成的PD-1/PD-L1信号通路在肿瘤的发生发展与侵袭转移的过程中起着重要的免疫调节作用。为了逆转肿瘤细胞免疫逃逸的现象,增强肿瘤的治疗效果。本课题中我们使用一种新型的活性氧(ROS)响应型的纳米粒(TPTN-NPs),在其表面修饰转铁蛋白受体靶向肽(T7)共转运si RNA-PD-L1与化疗药物阿霉素(Dox)用于小鼠乳腺癌的治疗:一方面降低肿瘤细胞表面PD-L1蛋白的表达,从而干扰PD-1/PD-L1信号通路的传导,保留T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用;另外使用化疗药物Dox靶向杀伤肿瘤细胞,化疗与免疫相结合达到协同治疗肿瘤的目的。T7可以与肿瘤细胞表面高表达的转铁蛋白受体相结合从而提高纳米粒的摄取,该纳米粒还可以响应肿瘤内高浓度的ROS释放出Dox。方法:(1)制备得到T7-PEG-TMC-NBC聚合物并进行核磁、红外表征。(2)通过体外模拟肿瘤微环境,探究聚合物的ROS敏感性;制备共转运纳米粒考察Dox的包封率、体外释放特点以及纳米粒对si RNA的吸附效率和保护性;考察共转运纳米粒的粒径电位,使用透射电子显微镜(TEM)观察纳米粒的形态。(3)通过流式细胞术、共聚焦显微镜、活细胞工作站,使用4T1作为细胞模型考察细胞对纳米粒的摄取情况和纳米粒在细胞内的分布;通过MTT实验考察细胞毒性;通过Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术考察载基因纳米粒的转染效率。(4)通过小动物活体成像技术考察纳米粒的靶向性。(5)建立小鼠皮下瘤模型,考察不同形式的纳米粒对肿瘤的抑制效果同时考察不同给药方式的毒副作用;通过Western blot、免疫荧光、定量即时聚合酶链反应(q RT-PCR)等技术考察治疗之后小鼠肿瘤组织的免疫学特征的改变。结果:(1)成功制备了T7-PEG-TMC-NBC聚合物,并可以自组装形成纳米粒。(2)纳米粒在肿瘤高浓度ROS的条件下,NBC基团发生断裂,纳米粒的亲水/亲油平衡被打破,纳米粒的粒径不稳定,Dox从纳米粒中快速释放;纳米粒对Dox的包封率为95.5%,载药量为14.3%;纳米粒与si RNA的最佳N/P为18;血清和RNA酶存在的条件下纳米粒可以较好的保护si RNA免受降解;共转运纳米粒的粒径142.7 nm,电位为27.3 mv;TEM图片显示共转运纳米粒形态规整、分布均匀。(3)摄取实验结果表明经过T7修饰后4T1细胞对纳米粒的摄取明显增多;共聚焦的实验结果表明纳米粒在细胞内可以被分解释放出药物,也证明了纳米粒ROS敏感的特性;MTT实验结果表明T7的修饰可以增加载药纳米粒对4T1细胞的毒性,但是对BRL-3A细胞的毒性增强作用不明显;Western blot和RT-PCR实验表明纳米粒可以将si RNA高效的运载至细胞并发挥其基因沉默作用。(4)纳米粒可以较好的靶向到小鼠肿瘤组织,T7修饰后会提高纳米粒的肿瘤靶向性。(5)优势治疗组(Dox–si RNA/TPTN-NPs)对荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用明显,而且治疗过程中小鼠的体重没有出现明显的减轻,经过治疗后肿瘤组织内PD-L1蛋白的表达明显下调,T淋巴细胞的浸润明显增加。结论:Dox–si RNA/TPTN-NPs具有较好的肿瘤靶向性,可以响应肿瘤内较高的ROS水平,释放药物。同时该共转运纳米粒可以将化学治疗与免疫治疗相结合达到高效治疗肿瘤的目的。