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背景与目的：KH901是一种肿瘤特异、有条件复制的腺病毒，其ElA基因受基因工程改造的端粒酶反转录启动子的控制，可在端粒酶高活性的肿瘤细胞中复制并裂解肿瘤细胞，而在端粒酶活性低的正常细胞中不能复制。同时，在腺病毒基因组E3区安插有GM-CSF的cDNA而取代MHC抑制基因，在肿瘤部位表达具有刺激免疫反应的GM-CSF。GM-CSF被认为是激发特异、持久抗肿瘤免疫的最主要的细胞因子。这样，KH901不仅能通过溶解细胞效应直接杀死肿瘤细胞而产生局部的抗肿瘤效应，而且也激发系统性的抗肿瘤免疫对远端的肿瘤组织产生作用。我们将通过体内、体体外等一系列实验来验证KH901的选择性复制和溶瘤作用，并考察其体内、体外表达GM-CSF的水平和生物分布状况。实验方法：体外实验：将KH901感染平板培养的人肿瘤和正常细胞，分别在感染24h和72h后测定KH901表达GM-CSF的水平和病毒载体感染量，并以MTT法测定KH901对平板培养的人肿瘤和正常细胞的选择性杀伤作用。体内实验：裸鼠皮下接种Hep3B、LNcap和SCC9细胞，构建相应移植瘤裸鼠模型。KH901瘤体内注射给药，以“相对肿瘤增值率”和“抑瘤率”来观察抗肿瘤效果。C57小鼠皮下接种CMT-64细胞，构建CMT-64移植瘤裸鼠模型，观察KH901瘤体内给药后的抗肿瘤效果，并检测肿瘤引流淋巴结CD11c阳性细胞的百分率。A549移植瘤体内注射KH901，于不同的时间点采血并摘取肿瘤，以ELISA法测定血清和肿瘤匀浆液中rhGM-CSF含量，以定量PCR测定KH901在肿瘤及各脏器中的组织分布。结果：体外实验显示，KH901在肿瘤细胞中大量复制(2526.4±136.8～2796.6±104.6TCID50/Cell)，表达大量的人GM-CSF[621.907±10.17～3924.497±17.79IU/（106细胞/24h）]，并显示出明显的杀伤作用(IC50为0.31±0.06～0.19±0.01MOI)，而在正常细胞中复制较差(56.8±9.2～90.1±14.4TCID50/Cell)，只有少量的GM-CSF产生[13.397±0.82IU/（106细胞/24h）]，杀伤作用轻微(IC50为92.33±9.12～121.20±19.94 MOI)。体内实验显示，KH901对Hep3B、LNcap和SCC9裸鼠移植瘤皆有显著的抗瘤效果；对CMT-64移植瘤有一定的抗瘤作用，但未显示诱生鼠CDllc+细胞的能力；在A549移植瘤的肿瘤和血清中能检测到大量腺病毒载体和GM-CSF表达，并随时间推移而减低，其他脏器的生物分布较少。结论：KH901具有肿瘤选择性复制和杀伤作用，并能表达具有生物活性的GM-CSF，显示出对实体性肿瘤的较强溶瘤治疗作用。