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目的:疼痛是一种不愉快的感觉和情绪上的体验,往往伴随潜在的组织损伤[1]。急性疼痛对机体具有保护作用,而慢性疼痛则会对机体具有不良影响。由于慢性疼痛机制错综复杂,针对单一靶点的药物往往疗效较差,且目前的镇痛药物多半具有镇痛不全、药物耐受、副作用等缺陷[2]。电针已经广泛应用于急性和慢性疼痛治疗中,相对药物的单一靶点,电针治疗影响疼痛的多个过程,安全有效且副作用小。世界卫生组织将运动系统慢性疼痛、术后疼痛、类风湿关节炎、三叉神经痛等多种疼痛列为针刺适应症[3]。虽然经过临床实验证实电针镇痛疗效确切[4-8],其机制却仍不明确。本实验利用CFA诱导的足底慢性炎性痛大鼠模型,发现电针能下调模型大鼠背根神经节中Nav 1.7的表达缓解慢性炎性痛。因此探索电针在CFA诱导的足底慢性炎性痛模型中的镇痛机制,为炎性痛的临床治疗和电针镇痛提供理论依据。方法:1.建立足底炎性痛大鼠模型。大鼠麻醉后,左后肢足底注射50μL CFA建立动物模型,对照组大鼠足底注射相同体积0.9%氯化钠溶液。造模后检测模型大鼠机械缩足反射阈值(PWT)和热缩足反射潜伏期(PWL)变化,验证大鼠模型制作是否成功。2.电针治疗。造模后1d开始电针治疗,电针刺激大鼠左侧“环跳”穴和“足三里”穴,两天1次,持续至造模后14天。检测电针治疗后大鼠PWT和PWL的变化,验证电针镇痛是否有效。3.大鼠抑郁状态检测注射CFA后14天进行蔗糖偏爱实验和强迫游泳实验检测大鼠是否处于抑郁状态,电针治疗是否能够改善抑郁状态。4.相关蛋白及分子检测Elisa检测造模后第14天大鼠血清皮质酮的含量,Western blot和qRT-PCR检测造模后第14天DRG中Navl.7及GR的mRNA和蛋白表达的变化。5.观察GR表达的改变对大鼠疼痛行为学及Navl.7蛋白表达的影响在足底注射CFA后第7天鞘内注射GR拮抗剂RU38486,连续给药5天。检测大鼠PWT、PWL及Nav1.7蛋白的变化。注射CFA后第7天鞘内注射GR正义寡核苷酸(GR sense oligonucleotide)(以下简称 GR sense)或反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)(以下简称GR antisense),检测大鼠PWT、PWL的变化。6.免疫荧光技术检测DRG中Nav1.7与GR的共标情况。7.观察GR表达的改变对电针镇痛效果的影响注射CFA后7天,在电针治疗的基础上,大鼠分别鞘内注射GR sense或GR antisense,与单纯EA治疗组的大鼠的PWT、PWL及Nav1.7表达情况做比较。结果:1.CFA诱导的足底炎性痛大鼠模型同侧PWT和PWL降低与对照组大鼠相比,模型组和电针组大鼠同侧的PWT和PWL在CFA注射后1 d显著降低(P<0.001),模型建立成功。至注射后14 d,模型组PWT与PWL均低于对照组(P<0.001)。2.电针治疗缓解大鼠炎性痛与模型组相比,注射CFA后7 d电针组大鼠PWT与PWL显著提高(P<0.001),且至术后14 d依然高于模型组(P<0.001)。3.电针治疗缓解大鼠抑郁情绪模型组大鼠蔗糖偏爱率较对照组显著降低(P<0.001),电针治疗后明显升高(P<0.01);强迫游泳实验中,模型组大鼠较对照组不动时间明显增加(P<0.01),电针治疗后有所降低(P<0.05)。4.电针治疗降低大鼠DRG中Nav1.7和GR的表达,降低大鼠血清中皮质酮的含量建模后14天,模型组大鼠DRG中Nav1.7mRNA与蛋白表达均上调(P<0.01,P<0.001),GR mRNA表达升高(P<0.001),细胞质中GR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)而细胞核中GR蛋白表达升高(P<0.001),模型组大鼠血清中皮质酮含量明显升高(P<0.001),电针治疗显著降低了nav1.7与GR mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.01)和大鼠血清中皮质酮含量(P<0.01)。5.鞘内注射GR拮抗剂缓解了 CFA引起的机械痛和热痛觉过敏,反转了注射CFA后Nav1.7的上调;鞘内注射GR sense加剧了大鼠机械痛和热痛觉过敏,注射GR antisense缓解了大鼠的机械痛和热痛觉过敏。鞘内注射GR拮抗剂RU38486后大鼠PWT与PWL升高(P<0.05,P<0.01),Nav1.7表达降低(P<0.01)。鞘内注射GR antisense后大鼠PWT与PWL升高(P<0.001,P<0.01),而注射GR sense后大鼠PWT与PWL降低(P<0.05,P<0.01)。6.免疫荧光结果显示在DRG中Nav1.7与GR共标7.鞘内注射GR antisense减少Nav1.7蛋白表达,增强电针的镇痛效果,而注射GR sense则增加Nav1.7蛋白表达,降低电针的镇痛效果。造模后两组大鼠在电针治疗的基础上分别鞘内注射GR sense或GR antisense,测试PWT和PWL。结果显示与电针组相比,电针联合鞘内注射GR sense的大鼠PWT和PWL显著降低(P<0.001)。电针联合鞘内注射GR antisense的大鼠PWT和PWL较电针组升高(P<0.01)。Western blot结果显示,相比电针组,电针联合鞘内注射GR sense后DRG中的Nav1.7蛋白水平增加(P<0.001),电针联合鞘内注射GR antisense后,DRG中的Nav1.7蛋白水平与单纯电针治疗相比降低(P<0.05)。结论:慢性炎性痛时DRG中GR激活后促进Nav1.7蛋白的表达,电针刺激通过抑制DRG中GR的转录活性降低Nav1.7蛋白的表达,缓解大鼠炎性痛及抑郁情绪。沉默GR可以逆转CFA引起的Nav1.7的高表达并增强电针的镇痛效应。综上GR可能是电针参与慢性炎性痛镇痛的重要靶点,本研究为更全面阐明电针镇痛机制提供了理论依据,为慢性疼痛的治疗开辟了新的思路。