杀光肩星天牛Anoplophra glabripennis (Motsch.) Bt菌株的筛选及其杀虫基因的克隆

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本文通过室内用榆蓝叶甲Pyrrhalta aenescens(Fairmaire)初步筛选出对鞘翅目昆虫有毒杀作用的Bt886、Bt.BC-1、Bt.t、Bt.tlow四株苏云金芽孢杆菌(eacillus thuringiensis,Bt)菌株,然后对这四株Bt用室内人工饲养的2-3龄光肩星天牛Anoplophra glabripennis(Motsch.)幼虫作生物测定。结果表明:Bt886,Bt.BC-1,Bt.t三菌株有效,幼虫死亡率分别为60%、60%、80%,体重比分别为0.615、0.645、0.741。其中Bt886对天牛生长发育有明显的抑制作用,即使60天后没有死亡,但已不能正常取食生长。Bt.tlow菌株对光肩星天牛无毒杀作用。 利用设计的引物从上述3菌株质粒DNA上扩增出0.819kb片断。纯化测序后,与发表的cry3Aa核苷酸序列比较,结果表明BT.BC-1,Bt.T与已发表Cry3Aa的核苷酸序列完全相同,Bt886的核苷酸序列与其它Cry3Aa有一个碱基不同。 用以Bt886质粒DNA为模板所扩增出的819bp片段作为探针,与其用HindⅢ酶切产物进行了Southern杂交,结果只在3.0kb左右处有一阳性带,表明3.0kb的杂交带中可能含有全长Cry3Aa基因,而且在质粒DNA上只有一个拷贝的Cry3Aa基因存在。 用PCR的方法进行Cry3Aa全基因扩增,结果扩增出预期的2.0kb左右的PCR产物。PCR产物进一步克隆成功后,部分测序结果表明,与报道的Cry3Aa序列同源。该基因处于进一步鉴定中。
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