本实验以直接喷洒的方式在牙鲆（Paralichthys olivaceus）幼鱼配合饲料中添加枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,采取连续投喂微与非连续投喂方式,研究枯草芽孢杆菌投喂方式对牙鲆幼鱼相关免疫酶活性、组织学结构、基因表达量及肠道菌群的影响,旨在为枯草芽孢杆菌在牙鲆幼鱼养殖中的高效、合理使用提供参考。主要研究结果如下:1.枯草芽孢杆菌对牙鲆幼鱼肝脏酶活性的影响。牙鲆饲料中添加枯草芽孢杆菌可以提高肝脏相关酶的活力,其中连续投喂E1与非连续投喂E2均能提高幼鱼肝脏AKP,LZM,ALT,SOD,GSH和LPS活性,但无法提高AMS和MDA活力;E2增强LZM,SOD和GSH活性的效果比E1要好;E1增强LPS,AKP以及ALT活性的效果比E2要好。2.枯草芽孢杆菌对牙鲆幼鱼胃、肠、肝组织学结构的影响。肝组织结构正常,肝细胞形态规则,实验组较对照组肝组织结构无显著性差异;实验组牙鲆的黏膜层较厚,肠道绒毛的数量和长度偏高,且实验组肠中黏液细胞分布较均匀,数量较多;实验组胃黏膜层皱襞的皱褶度较高,尤其E2;胃黏膜中有Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型黏液细胞,肠黏膜中仅有Ⅲ型黏液细胞;牙鲆投喂枯草芽孢杆菌后,肠黏膜和胃黏膜黏液细胞数量增多并于投喂后15 d达到峰值,且E1和E2组间差异不显著;胃中Ⅱ型和Ⅳ型黏液细胞数量增多,胃黏液成分由中性黏多糖向酸性黏多糖转变。3.枯草芽孢杆菌对牙鲆幼鱼脾脏免疫基因表达的影响。牙鲆饲料中添加枯草芽孢杆菌可以激活牙鲆脾脏中免疫相关基因的上调表达,其中SOD、LZM和IL-1的上调表达明显;非连续投喂方式上调牙鲆脾脏SOD和IL-1基因的效果比连续投喂方式要好;牙鲆脾脏中LZM基因上调的效果跟投喂方式无关。4.枯草芽孢杆菌对牙鲆幼鱼肠道菌群结构的影响。E0、E1和E2牙鲆肠道菌群OTU数目的平均值分别为657、1120和988,E1菌群的shannon、simpson、Chao1和Ace指数最大,菌群多样性最高,物种分布均匀最好。E1和E2肠道中厚壁菌门相对丰度增加,分别达到14.20%和19.68%,而对照组仅为7.24%。E1和E2组肠道中芽孢杆菌属相对丰度增加明显,分别达到1.09%和1.06%,而对照组仅为0.07%,说明枯草芽孢杆菌在肠道中成功定植,连续投喂与非连续投喂产生的定植率无显著差异。该论文有图15幅,表14个,参考文献121篇。