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盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CL),俗名“瘦肉精”,是一种β-肾上腺素受体激动剂,因具有增加动物酮体瘦肉率、提高饲料转化率的作用,常常被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产。近几年来, CL残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重损害了人们的健康。虽然国家的政策法规己经严令禁止使用盐酸克伦特罗作为饲料添加剂,但仍有违规应用。因此,为保证肉品质量和人类的健康,建立准确、快速、简便的检测盐酸克伦特罗残留的方法具有重要的意义。本文通过研制针对CL的多克隆抗体,初步建立了检测CL的间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金标记免疫分析法,两种方法对CL的残留快速检测具有良好的特异性和灵敏性。利用重氮化法将CL分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin ,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)通过化学方法进行偶联,制备出免疫原CL-BSA和包被原CL-OVA。将免疫原CL-BSA与等体积的弗氏佐剂充分混匀后,背部脊髓两侧多点免疫6-8周龄的新西兰大耳白。多次免疫后,兔子产生的抗血清效价高达1:12800,将血清分别经过饱和硫酸铵沉淀法和免疫亲和层析法进行纯化后,得到特异性的CL抗体。以纯化的抗体为基础,建立了CL的间接竞争酶联免疫吸附法。试验表明,该方法在0.32 ng/mL-200 ng/mL范围内, IC50为2.18 ng/mL,IC15为0.05 ng/mL,对沙丁胺醇,妥洛特罗和莱克多巴胺的交叉反应率分别为8.28%、7.75%和5.26%,表明此方法具有较高的特异性,并对方法的重现性、精确度、灵敏度等进行了评价。在样品的实际检测中,分别对猪肉、牛肉、羊肉和猪肝进行了检测,消除了基质影响,样本组织回收率为73.6%-90.0%,并采用GC-MS法对所建立的ELISA方法进行了比较和验证,两种方法呈现出良好的线性关系,相关系数R2为0.974。结果证明,所建立的间接竞争ELISA方法各项参数均能达到实际检测的需要。建立了以胶体金标记抗体为基础的免疫快速检测技术检测CL,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被羊抗兔为质控带,CL-OVA为检测带,通过优化开发了渗滤式快速检测胶体金试纸条,其对CL标样的最低检测限为10 ng/mL。对于实际样品的检测,采用合理稀释样品提取液的方法消除了基质的影响,且在添加回收率试验中有很好的梯度。该方法检测过程简单,所需时间短,结果通过目视直接判断,能够广泛的用于动物性食品中CL的快速定性检测。