结核病严重威胁着人类的健康。据世界卫生组织(World Health Organization, WHO)最新公布统计数据显示,2012年全球新发儿童结核病约53万,大约7.4万死于结核病。儿童结核感染的临床症状不典型、诊断较困难,给儿童结核病的控制带来了严峻的挑战。上海市某医院为上海市儿童结核病的定点医疗机构,同时也收治外省市儿童结核病患者。本研究对2011年1月1日至2012年12月31日间上海市该医院儿童结核病患者进行分类、培养、药物敏感性检测、结核分枝杆菌分型和多位点串联重复可变序列分析,了解儿童结核病各类型的构成情况,临床表现与诊断时长的关系,以及儿童结核病患者结核分枝杆菌耐药情况、菌型分布及其分子流行病学特征。(1)儿童结核病的流行现况收集2011-2012年期间所有确诊或疑似结核病患儿的病史资料,包括姓名、性别、年龄、出生地、居住地等基本资料,以及主要临床表现、诊断依据、卡介苗接种史、结核病患者接触史、发病时间、确诊时间、诊疗过程、涂片培养结果等病情资料。对资料进行分析,644例患儿中176人次为重复入院,11例复治,35例因其它疾病排除,最终,共有422例患儿纳入本研究中。研究结果显示,①儿童结核病患者中男性(67.3%)多于女性(32.7%)；发病年龄主要集中于0-1岁,为230例(54.5%),其次为1-3岁,为72例(17.1%)；本市儿童结核病患者占总病例数的23.9%(101/422)；淋巴结核和肺结核占有较大比例,分别为176例(41.7%)和130例(30.8%)；②不同结核病年龄分布不同,176例淋巴结核中162例(92.0%)集中在0～1岁年龄段,播散性结核集中在0-1岁和1-3岁年龄段,分别为28例(43.7%)和22例(34.4%),其它结核主要集中在7-14岁和3-7岁年龄段,分别为24例(46.2%)和16例(30.8%),不同疾病类型在不同年龄组的分别差别具有统计学意义(x 2=221.413,p<0.001)；③肺结核病患者最短诊断明确时间为3天,最长90天；淋巴结核最短6天,最长2年；播散性结核患者最短诊断时间为3天,最长为1年；其他结核最短7天,最长9月。明确诊断时间主要集中在16～30天内,肺结核、淋巴结核、播散性结核和其它结核分别为33.8%、32.4%、29.7%、40.4%。淋巴结核首发症状表现为淋巴结肿大；其它各型结核则主要表现为发热或／和咳嗽,以及伴随有乏力,嗜睡,食欲减退等症状。④首次诊疗机构除淋巴结核外其它各级医疗机构均有分布,主要集中于二级医疗机构,肺结核、播散性结核和其它结核分别为69例(53.0%)、31例(48.4%)和34例(65.4%)；淋巴结核主要集中于三级医疗机构(77.8%)；肺结核组93.8%、淋巴结核98.3%、播散性结核95.3%、其它结核90.4%由三级医疗机构明确诊断。⑤儿童结核病涂片总阳性率为24.4%,培养阳性率为34.6%,耐药率为20.6%,耐多药结核病为5.7%。综上所述,儿童结核病男性患者多于女性；随年龄的增加淋巴结核和播散性结核在患者中的构成下降；各型结核病均有不同程度的诊断延误,最长的延误时间长达2年(淋巴结核)。需要提高一二级医疗机构对儿童结核病的诊疗水平；耐药结核病在儿童结核病中占有一定比例,需要加强耐药儿童结核的管理。(2)结核分枝杆菌复合群菌型分析及分子生物学特征本研究旨在了解儿童结核病患者的临床分离株菌型构成情况,以及菌株间的生物多态性。研究采用化学法、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)法和免疫胶体金法进行分枝杆菌菌型鉴定,分析三种方法鉴定分枝杆菌的能力；运用缺失区域(deleted region, RD)的扩增(RD1、RD9、RD10)鉴定结核分枝杆菌复合群菌株,分析结核分枝杆菌复合群菌株的构成情况；扩增RD105区段鉴定北京基因型菌株；多位点串联重复可变位点序列分析结核分枝杆菌复合群菌株的分子生物学特征。结果显示,在所有191株分离株中,共获得180株复苏成功的分枝杆菌阳性培养物,其中164株为结核分枝杆菌复合群菌株、16株为非结核分枝杆菌菌株,与化学法比较,PCR法特异性(100%)和敏感性(100%)好,胶体金法较差(87.5%和49.4%)。164株结核分枝杆菌复合群菌株中,83株为卡介菌(bacillus Calmette-Guerin, BCG)、81株为结核分枝杆菌(M. tuberculosis),BCG菌株主要分离自淋巴结穿刺液中(90.4%,75/83),结核分枝杆菌主要分离自淋巴结穿刺液以外的标本。基因型鉴定发现164株分离株中63株为北京基因型。多位点可变数目串联重复序列分析(Multiple-locus variable-number tandem repeat analysis, MLVA),共分离出72个基因型,56个为独立基因型,Hunter-Gaston分辨率指数(HGI)为0.74,排除BCG、同一患者重复菌株、污染菌株因素后的HGI为0.996；与MLVA数据库比对显示M. Bovis BCG 83株；Beijing/W family 55株；M. Bovis 12株；Haarlem family2株；Ural family 1株；Canetti family 1株; 8株为新的基因型,与Delhi/CAS株和Beijing株相近,结合RD105结果显示亦为Beijing/W family菌株；2株与数据库中的New-1株相近。83株BCG菌株分离自67例患儿,来源于全国10个省市,主要来源于上海(35/67)、安徽(9/67)、江苏(8/67)、浙江(7/67),各地域间分离的BCG菌株实验选择的12个位点无差异性。结果表明,儿童结核分枝杆菌感染主要由M. Bovis BCG和M. Tuberculosis引起,M.Tuberculosis的分子生物学特征明显,以北京基因型为主；临床分离的BCG菌株分子生物学特征无差异性。