目的 探讨用限制片段差异显示聚合酶链反应(Restriction Fragment Differential Display-Polymerase Chained Reaction,RFDD-PCR)技术建立基因差异表达谱的方法,及其应用于高通量分析人类疾病差异表达谱的可行性。初步分析比较乳腺肿瘤各阶段表达谱特征,筛选乳腺肿瘤侯选基因,为进一步研究提供线索。材料与方法 采集乳腺癌根治术病人的乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织,用RFDD-PCR技术平行操作,获得三种组织全部转录组片段。然后以7%尿素变性聚丙烯酰胺电泳进行表达差异基因片段的分离、显示,结合http://www.Qbiogene.com/display/数据库资料,应用IMAGE TOOL,ImageQuant TL等软件,对各组织间有表达差异的基因进行生物信息学分析,筛选乳腺肿瘤侯选基因。结果 建立了乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织的基因表达谱,获得基因片段5407个,其中在癌组织和正常组织间有表达差异的片段为1491个,癌组织与转移淋巴结间的差异片段有1176个,而转移淋巴结与正常组织问的差异片段为1462个,分别占表达数的40.9%,33.9%,39.6%。经差异片段的生物信息学分析,已筛选出部分乳腺癌侯选基因所对应的条带,包括新的乳腺肿瘤相关基因,如PPARA,BCL11B等,以及可能为新基因/EST的候选片段,有待进一步研究证实。结论 RFDD-PCR技术可以检测出大量表达基因,并同时比较三种或三种以上样本的表达差异,尤其适用于人类疾病差异表达谱分析,对疾病相关基因做初筛,获得较全面的肿瘤侯选基因,为下一步研究打下基础。同时,除通过差异比较筛选疾病