论文部分内容阅读
甲型流感病毒是造成季节性流感和历史上几次流感大流行的主要病原体。为了在宿主体内存活和复制，流感病毒蛋白和基因发挥多种功能，逃离免疫监视，促进病毒致病。PB1-F2是流感病毒PB1基因下游另一个开放阅读框编码的非结构蛋白，被认为是一个促炎分子，并可以促进病毒的致病性。多数亚型毒株的PB1-F2定位与线粒体，诱导细胞凋亡，也有少部分出现在细胞核内，影响病毒复制。1918年西班牙流感大流行造成4千万人死亡，此株流感病毒流行范围广，致死率强，引起重大社会危害。 为探究1918H1N1西班牙流行株的PB1-F2蛋白致病机制，本研究利用反向遗传学技术构建其PB1-F2缺失病毒株，感染细胞和动物模型，研究野生株与缺失株病毒复制，致病性和导致炎症反应的差异。结果表明:(1)野生株与PB1-F2缺失株感染MDCK细胞后病毒生长曲线一致，小鼠感染后肺组织病毒滴度一致，表明PB1-F2不影响病毒复制。(2)野生株TCID50及MLD50低于缺失株，揭示了PB1-F2能促进病毒的致病性。(3)小鼠感染模型中，野生株死亡率更高，体重下降情况重于缺失株，显示体内实验结果同样证明PB1-F2的强致病性。(4)免疫细胞感染野生株和缺失株后，缺失株炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α低于野生株;小鼠肺部野生株炎症细胞浸润多于缺失株;野生株肺部损伤重于缺失株。表明PB1-F2可促进炎症反应。本研究构建了1918西班牙流行株的PB1-F2野生株和缺失株，证明PB1-F2不影响病毒复制，但可以促进病毒致病和炎症反应，为深入研究流感病毒致病机制，特别是炎症对和宿主免疫反应的调控作用，提供了良好的小鼠体内模型。为解析临床上“细胞因子风暴”对人体免疫保护应答和疾病转归的影响，提供有价值的实验数据。并为控制流感病毒感染，减少病理性损伤提供新思路。 虽然禽流感病毒通常难以感染人，但也有一些人类感染这些病毒的报道。2013年，有报道禽流感H7N9感染人病例，尤其是今年初，仅两个月我国就有H7N9流感352例发病，140例死亡。为应对H7N9禽流感病毒爆发，研发抗H7N9的中和性单克隆抗体，具有重要意义。 本研究设计含H7亚型流感病毒HA基因的DNA疫苗，免疫Balb/c小鼠后，获取产生抗体的B细胞，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。最终获得两株IgG亚型鼠源单克隆抗体S-6-8-10和S-496-4，它们可中和H7N9亚型流感病毒。这两株抗H7N9亚型流感病毒单克隆抗体的制备，为预防和控制H7N9禽流感爆发奠定了基础。