【摘 要】
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本文以芹菜中芹菜苷为研究对象,针对其参与血压调节的途径与机制等关键问题,探讨芹菜苷对HUVEC高血压损伤模型的修复和保护情况,通过RT-PCR、Western Blot等技术研明芹菜苷对
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本文以芹菜中芹菜苷为研究对象,针对其参与血压调节的途径与机制等关键问题,探讨芹菜苷对HUVEC高血压损伤模型的修复和保护情况,通过RT-PCR、Western Blot等技术研明芹菜苷对血压调节主要信号通路PI3K/Akt、NADPH-ROS的作用,确定芹菜苷在血管内皮细胞中发挥作用的途径,研明其中机理,为芹菜干预血压调节的研究提供理论基础。获得如下结果：(1)以人脐静脉内皮细胞为模型载体,采用高血压发病相关因子Ang ⒈、Ang Ⅱ、H202诱导HUVEC建立高血压损伤模型。通过考察HUVEC形态变化、细胞活性、细胞损伤程度及细胞功能变化,评价模型的程度。实验发现,除Ang I正常剂量组(0.1μM)外,其他各诱导剂在各时间点上均可通过促使细胞发生氧化应激,降低细胞活性,减少NO释放来损伤HUVEC,其中0.1μM的Ang II诱导12 h在不致使细胞死亡情况下,对细胞活性抑制达22.9%,MDA升高至4.89 nmol/mgprot(升高1.7倍),SOD降低至31.62mgprot/mL(降低3倍左右),血管内皮细胞功能因子NO释放降低至32.33 μmol/L(降低1.5倍),eNOS活力降低至0.26 U/mL(降低59倍),ET-1变化不明显,被选作之后模型的诱导剂,建立损伤模型。(2)40 μM芹菜苷作用于Ang II诱导的HUVEC高血压损伤模型12 h可以通过促进细胞增殖来增加细胞数量(上升17.46%)；降低MDA的释放(由6.34降至1.93nmol/mgprot),增强SOD活性(由31.62升至79.21 mgprot/mL)来减少氧化应激的发生；同时可以增加NO的释放(由28.82升至48.26 μmol/L),提高eNOS的活性(1.81升至13.63 U/mL),减少ET-1的生成(由10.15降至5.68 ng/L)来提高HUVEC发挥调节血压的功能,使其功能趋于未诱导前。芹菜苷处于较低浓度(50 μM前)是上述功能随时间呈现剂量依赖增加的效应,但随剂量增加(50μM后)芹菜苷的修复细胞的的功效反而有所降低。综合不同剂量芹菜苷作用不同时间的结果,最终选择40μM的芹菜苷作用12 h作为后续研究的对象。(3)芹菜苷发挥修复HUVEC高血压损伤模型细胞内皮功能主要是通过激活PI3K/Akt信号通路,抑制NADPH信号通路实现的。通过加入LY294002、罗布麻宁等抑制剂,发现芹菜苷可以通过PI3K/Akt信号通路显著激活eNOS使其1177位丝氨酸磷酸化,发挥释放NO的作用,这一过程会被NADPH信号通路抑制,说明芹菜苷可以通过抑制NADPH达到增加NO释放。芹菜苷在模型中发挥功能时未发现PI3K/Akt信号通路和NADPH信号通路之间有协同关系,说明此过程在血管内皮细胞中不发生或者功效被抵消。
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