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目的:基于视网膜新生血管生成相关的mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路,探讨右归丸治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用靶点和分子机制,为中医药防治糖尿病视网膜病变提供新的思路与科学依据。方法:选择大鼠视网膜微血管内皮细胞,通过在培养基中同时加入33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2,将内皮细胞培养96h,建立体外高糖缺氧细胞模型,模拟PDR过度增殖的病理状态。将内皮细胞按不同培养条件分为正常组、模型组、右归丸药物血清高、中、低剂量组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和细胞划痕法分别观察右归丸药物血清对模型细胞增殖和迁移的影响;采用RT-PCR法检测各组细胞mTORmRNA、4EBP1mRNA、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA基因表达水平;Western blot法检测各组细胞p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平。结果:1.在大鼠视网膜微血管内皮细胞培养基中加入33mmol/L的葡萄糖和100umol/L的CoCl2培养96h,可成功模拟出PDR内皮细胞过度增殖的病理状态。2.MTT检测细胞增殖结果:24h时,模型组OD值低于正常组,差异有统计学意义(p<0.005);右归丸药物血清高、中剂量组OD值高于模型组,差异有统计学意义(p<0.005)。48h时,正常组、模型组、高、中、低剂量组之间差异无统计学意义(p>0.005)。96h时,模型组OD值高于正常组,差异有统计学意义(p<0.005);右归丸药物血清高、中剂量组OD值低于模型组,差异有统计学意义(p<0.005)。细胞划痕检测迁移结果:48h时,模型组迁移率低于正常组,差异有统计学意义(p<0.005);右归丸高剂量组迁移率高于模型组,差异有统计学意义(p<0.005)。96h时,模型组迁移率高于正常组,差异有统计学意义(p<0.005);右归丸高、中剂量组迁移率低于模型组,差异有统计学意义(p<0.005)。3.RT-PCR法检测基因表达结果:与正常组比较,模型组mTOR、4EBP1、HIF-1α、VEGFmRNA基因表达均明显升高(p<0.005)。与模型组比较,右归丸各浓度组mTOR、4EBP1、HIF-1α、VEGFmRNA基因表达均有不同程度降低(p<0.005),且随着右归丸药物浓度的增加,各基因表达水平越低。Western blot法检测蛋白表达结果:与正常组比较,模型组p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平均明显升高(p<0.005)。与模型组比较,右归丸各浓度组p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达均有不同程度降低(p<0.005),且随着右归丸药物浓度的增加,各蛋白表达水平越低。结论:右归丸药物血清能够通过抑制大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖和迁移,从而抑制视网膜新生血管的生成。其机制可能与调控mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路中相关基因与蛋白的表达有关。