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第一章铜绿假单胞菌注射液治疗乳腺癌癌性溃疡的临床研究目的研究铜绿假单胞菌注射液治疗乳腺癌癌性溃疡的有效性和不良反应。方法对乳腺癌癌性溃疡患者随机分组,分别采种不同的治疗方法：单纯化疗(对照组)、铜绿假单胞菌注射液联合化疗(治疗组)。分别测量治疗前后溃疡大小以及肿块大小,观察铜绿假单胞菌注射液在乳腺癌癌性溃疡治疗中的疗效以及可能出现的不良反应。结果同对照组相比,铜绿假单胞菌注射液联合化疗促进患者乳腺癌癌性溃疡面积缩小(治疗组有效率85.7%,对照组有效率33.3%,P<0.05),促进乳腺癌性肿块缩小,但无统计学差异(治疗组有效率57.1%,对照组有效率33.3%,P>0.05)；在铜绿假单胞菌注射液治疗过程中除发热外无明显不良反应发生。结论铜绿假单胞菌注射液对于乳腺癌癌性溃疡面愈合有促进作用,且无明显不良反应。第二章铜绿假单胞菌注射液对于乳腺癌治疗作用的体外杀伤机制研究目的铜绿假单胞菌注射液在体外实验中对人乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡和增殖的影响。方法使用体外培养至对数生长期的MCF-7细胞设立实验组和对照组,实验组给予不同浓度的铜绿假单胞菌注射液,对照组给予等量RPMI 1640培养基处理后,MTT比色法检测铜绿假单胞菌注射液对体外培养的MCF-7细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测其对MCF-7细胞凋亡及细胞周期的影响；荧光染色法观察其诱导体外培养的MCF-7细胞凋亡的形态学改变。结果与对照组相比,多个浓度的铜绿假单胞菌注射液均可抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05)；促进MCF-7细胞的凋亡(PA-MSHA组凋亡率2.14±0.2457%,对照组凋亡率1.19±0.1778%,P<0.01),升高MCF-7细胞中G0／G1期细胞比例(PA-MSHA组73.00±7.10%,对照组为49.83±9.83%,P<0.05)、降低S期细胞所占百分比(P<0.05),荧光显微镜观测示MCF-7细胞呈现明显的凋亡图像。结论铜绿假单胞菌注射液可能通过阻滞乳腺癌MCF-7细胞周期中G0／G1期,诱导细胞凋亡,从而抑制体外培养的乳腺癌细胞的增殖。第三章铜绿假单胞菌注射液对于乳腺癌治疗作用的体内治疗作用及机制研究目的：1、研究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)在高自发转移乳腺癌小鼠模型中对乳腺癌的治疗作用,并探讨其可能的作用机理。2、研究铜绿假单胞菌注射液对于晚期乳腺癌患者细胞免疫功能的影响。方法：1、使用4T1细胞株通过细胞悬液注射法建立高自发转移乳腺癌小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分成4组,即阴性对照组(A组),CTX治疗组(B组),PA-MSHA组(C组),联合治疗组(D组),给予不同处理,同时培养正常小鼠设为空白对照组(E组)。比较治疗后各组间荷瘤小鼠的肿块大小及肿块重量、生存期、肺转移率、脾指数；并采用流式细胞检测法分析比较各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群,采用液相多重蛋白定量技术(CBA)检测小鼠外周血细胞因子TNF-αIFN-γ、IL-5、IL-4、IL-2含量。Pearson相关性分析法分析实验小鼠外周血T细胞亚群、TNF-α、IFN-γ、IL-5、IL-4、IL-2水平与小鼠生存期之间的关系。2、选择临床上有转移的晚期乳腺癌患者14例,随机分为化疗组和化疗联合PA-MSHA组,两组同期进行化疗,实验组加用铜绿假单胞菌注射液,隔日一次进行治疗。于三周期化疗后,分别抽取外周血,采用流式细胞术(FCM)检测CD3+总T淋巴细胞、CD4+辅助T细胞、CD8+杀伤／抑制T细胞,计算CD4+／CD8+比值。结果：1、肿块大小及瘤重比较中,各治疗组均小于阴性对照组(P<0.05),CTX治疗组同PA-MSHA组间无统计学差异(P=0.160),均大于联合治疗组(P<0.05)。肺转移率比较中,阴性对照组转移情况明显高于联合治疗组(P=0.029),其余各组之间的转移情况差异无统计学意义(P>0.05)。生存期比较中,PA-MSHA组同CTX治疗组间差别无统计学意义(P=0.056),均高于阴性对照组(P<0.05),低于联合治疗组(P<0.05)。脾指数比较中,空白对照组小于其他四组,联合治疗组高于其他四组(P均小于0.05)；CTX治疗组与PA-MSHA组之间差异无统计学意义(P=0.352)。同阴性对照组相比,铜绿假单胞菌注射液可提高外周血T淋巴细胞中CD4+T细胞所占比例,降低外周血T淋巴细胞中CD8+T细胞所占比例,提高CD4+／CD8+比值(P<0.05)。升高外周血细胞因子IL-2水平.(P<0.05)；与CTX共同使用可提高TNF-αIFN-γ水平(P<0.05). Pearson相关性分析显示,CD4+T细胞比例与处理组小鼠生存期之间存在强正相关性(r=0.714,P<0.01)；CD8+T细胞比例与生存期之间存在强负相关性(r=0.790,P<0.01)；CD4+／CD8+与生存期之间存在强正相关性(r=0.781,P<0.01)；IL-2与生存期之间存在一般正相关性(r=0.552,P<0.05)；其余细胞因子与生存期之间无明显相关性(P>0.05)。2、铜绿假单胞菌注射液治疗组同对照组患者外周血中T淋巴细胞占总淋巴细胞比例无差别(P>0.05),T细胞中,实验组CD4+T细胞比例高于对照组、CD8+T细胞比例低于对照组、CD4+／CD8+比值高于对照组(P<0.05)。结论：1、在使用4T1小鼠乳腺癌细胞株建立的高自发转移乳腺癌小鼠动物模型体内,存在着免疫失衡的现象。2、PA-MSHA能够调节乳腺癌动物模型中的T细胞亚群和多个细胞因子水平(IL-2、TNF-a水平,IFN-γ),改变其免疫失衡状态,从而发挥抑制肿瘤生长、减少转移、延长生存期作用；并可与化疗发挥协同作用。3、PA-MSHA对于临床Ⅳ乳腺患者有明确的改善免疫功能的作用,可能有利于改善患者预后。