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干细胞是指未成熟细胞,具有自我更新和分化能力,在一定的诱导条件下,可以分化为其他细胞、组织及器官。干细胞可分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)和成体干细胞(Adult stem cells),它们在细胞疗法、基因治疗、发育学研究、药理及毒理学等研究中已显示出无可比拟的作用和优越性。成体干细胞是存在于发育成熟个体组织中的可自我更新和分化为原组织所有细胞类型的未分化细胞[4]。其中存在于骨髓基质中的间充质干细胞(mesenchymal stem cells)是研究最早和最为深入的一类多能干细胞,其来源于发育早期的中胚层和外胚层,具有广泛的分化潜能,并已经在多种疾病和损伤的试验性治疗中显示出良好前景。我们在前期成体干细胞研究基础上,成功分离大鼠真皮多能干细胞(dermal Multipotent Stem Cells dMSCs ),初步研究提示真皮多能干细胞是一种重要的参与创伤修复启动的组织修复细胞。为了深入研究真皮多能干细胞参与创伤修复启动的分子机制,屈纪富等构建了伤口液作用前后真皮多能干细胞差异表达cDNA文库,为进一步筛选、克隆与真皮多能干细胞参与创伤修复相关的差异表达基因奠定了基础。本实验首先对真皮多能干细胞进行分离、培养和鉴定;接着观察了真皮多能干细胞对伤后不同时相伤口液的反应性变化,以探讨真皮多能干细胞在创伤愈合中的意义;然后通过菌液PCR扩增抑制消减杂交文库中485个克隆的插入片断,制作基因芯片对文库中的克隆进行反向鉴定,对差异表达显著的分子克隆测序并进行生物信息学分析,再通过体外实验(创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞前后相应基因或蛋白的表达变化)和整体实验(观察正常大鼠皮肤和创伤后大鼠伤口皮肤组织表达相应基因或蛋白的变化)两个方面观察所筛选的基因表达变化,以初步验证这些差异表达基因在创伤愈合中的意义;最后,我们选择分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(Secretory leukocyte protease inhibitor SLPI)进行研究,初步研究了SLPI对真皮多能干细胞的促增殖作用及其可能的机制。主要结果和结论如下:1.本实验分离、纯化的真皮多能干细胞形态较为均一,多次传代后仍能保持很强的增殖能力;在一定的诱导条件下,真皮多能干细胞具有向成骨细胞、脂肪细胞和肌