论文部分内容阅读
研究目的:以临床常见的缺血性脑白质损伤为研究切入点,研究S1P受体激动剂FTY720在小鼠低灌注脑白质损伤后对髓鞘脱失、认知功能障碍的影响,并探讨在小鼠低灌注后FTY720对小胶质细胞活化以及表型转化的影响,FTY720对少突胶质细胞存活、增殖、分化的影响;研究FTY720对原代培养的小胶质细胞表型的影响及干预后的小胶质细胞对少突胶质前体细胞分化成熟的影响。研究方法:建立小鼠BCAS模型,FTY720对小鼠造模后认知功能的影响通过8臂迷宫行为学测试方法探究;LFB染色观察FTY720对小鼠造模后髓鞘的影响;免疫荧光染色、western blot方法观察FTY720干预后少突胶质细胞、小胶质细胞和髓鞘、轴突等在小鼠低灌注损伤后第3天、10天、1个月的动态变化;免疫磁珠细胞分选流式检测法检测小鼠低灌注后不同时间点FTY720对小胶质细胞表型的影响;体外培养原代小胶质细胞及少突胶质前体细胞(OPCs),采用RT-PCR法检测FTY720干预后小胶质细胞M1及M2型指标的变化;ELISA法检测小胶质细胞上清TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-13分泌量的变化;将干预后的小胶质细胞上清液加入纯化后的少突胶质前体细胞中,采用Olig2与MBP共染免疫荧光染色方法观察FTY720对少突胶质前体细胞分化成熟的影响。研究结果:成功建立小鼠低灌注白质损伤模型(BCAS)。FTY720干预后,LFB评分显示白质区域损伤情况明显好于BCAS手术组。FTY720在低灌注后抑制小胶质细胞活化,促进小胶质细胞表型向M2型转化,促进少突胶质细胞的存活、增殖及分化,减轻小鼠的认知功能损害。FTY720处理可抑制LPS+IFNγ诱导的小胶质细胞M1型转化,增加M2型标记物的表达量;FTY720促进小胶质细胞向M2型转化。FTY720干预后的小胶质细胞促进少突胶质前体细胞的分化成熟。结论:FTY720通过促进小胶质细胞向M2型转化,从而促进少突胶质细胞的存活、增殖、分化,减少髓鞘脱失,改善缺血性脑白质损伤,减轻小鼠的认知功能损害。因此FTY720有望成为缺血性脑白质损伤治疗的潜在靶点。