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鸡蛋是导致婴幼儿和儿童过敏的主要过敏食物之一,鸡蛋过敏在5岁以下儿童中的发生率约为2%。鸡蛋过敏的物质基础是致敏原的致敏性表位。表位又称抗原决定簇,是致敏原中与抗体结合或被细胞表面受体识别,并诱导免疫反应的特殊化学基团。表位按照空间结构可分为线性表位和构象表位,按照表位识别受体细胞的不同可分为T细胞表位和B细胞表位。由于加工对致敏原空间结构的改变,构象表位比线性表位更易被破坏。B细胞表位是可被B细胞表面受体或B细胞分泌的抗体特异性识别并相互结合的表位。在过敏反应中,两类B细胞线性表位很重要,即B细胞IgG和IgE线性表位。此外,表位具有特异性,研究人群的不同,其表位鉴定结果会有所差异。因此,定位出针对中国人群的鸡蛋致敏原B细胞线性表位对深刻认识中国人群鸡蛋过敏具有重要意义。目前针对中国鸡蛋过敏患者进行的卵转铁蛋白表位定位已经开展,其余3种鸡蛋蛋清中的主要致敏原表位尚待鉴别。本研究通过生物信息学技术对鸡蛋卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的B细胞线性表位进行预测,并基于中国鸡蛋过敏人群采用肽扫描定位技术鉴定3种蛋白的B细胞线性表位,而且进一步鉴定了溶菌酶致敏原的主要表位,主要研究方法、结果和结论如下:(1)使用DNAStar、Immunomedicine Group、BepiPred、Bcepred和ABCpred五种生物信息学工具分别对3种鸡蛋致敏原的氨基酸序列进行解析,预测其潜在的B细胞线性表位。通过综合分析,预测出6个卵类粘蛋白B细胞线性表位,分别为AA8~32(FPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGT)、AA52~58(TNISKEH)、AA66~90(VPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRA)、AA102~104(YDN)、AA113~144(VEQGASVDKRHDGGCRKELAAVSVDCSEYPKP)和AA148~161(AEDRP LCGSDNKTY)。预测出14个卵白蛋白B细胞线性表位,分别为AA42~45(VYL G)、AA47~51(KDSTR)、AA58~60(VRF)、AA70~78(IEAQCGTSV)、AA92~99(TKPNDVYS)、AA110~124(ERYPILPEYLQCVKE)、AA140~142(DQA)、AA151~154(ESQT)、AA158~168(IRNVLQPSSVD)、AA188~194(AFKDEDT)、AA199~208(FRVTEQESKP)、AA264~269(KLTEWT)、AA272~278(NVMEERK)和AA287~296(KMEEKYNLTS)。预测出4个溶菌酶B细胞线性表位,分别为AA18~21(DNYR)、AA39~51(NTQATNRNTDGST)、AA62~78(WWCNDGRTPG SRNLCNI)和AA109~117(VAWRNRCKG)。(2)利用间接ELISA筛查了78个中国人群鸡蛋过敏患者血清样本的特异性组分抗体,筛查出的s IgE阳性率分别为卵类粘蛋白38.4%(30/78)、卵白蛋白47.4%(37/78)、卵转铁蛋白30.7%(24/78)和溶菌酶46.1%(36/78),s IgG阳性率分别为卵类粘蛋白88.4%(69/78)、卵白蛋白89.7%(70/78)、卵转铁蛋白64.1%(50/78)和溶菌酶78.2%(61/78)。(3)根据肽扫描定位原理,利用斑点杂交法筛选出与卵类粘蛋白过敏患者血清池中IgE和IgG特异性结合的多肽片段,定位出卵类粘蛋白的9个B细胞IgE线性表位和4个IgG线性表位。其中,9个B细胞IgE线性表位分别为AA6~16(SRFPNATDEKG)、AA15~22(KGKDVLVC)、AA24~34(KDLRPICGTDG)、AA33~43(DGVTYTNDCLL)、AA48~58(IEFGTNISKEH)、AA75~85(NTTSED GKVMV)、AA84~94(MVLCNRAFNPV)、AA123~133(HDGGCRKELAA)和AA171~181(VVESNGTLTLS),4个B细胞IgG线性表位分别为AA75~85(NTTS EDGKVMV)、AA84~94(MVLCNRAFNPV)、AA144~154(PDCTAEDRPLC)和AA174~184(SNGTLTLSHFG)。在这两种表位中,AA75~85(NTTSEDGKVM V)、AA84~94(MVLCNRAFNPV)和AA174~181(SNGTLTLS)为它们共有的表位。另外,AA75~85是IgG线性表位中未见报道的新表位。(4)根据肽扫描定位原理,利用斑点杂交法筛选出与卵白蛋白过敏患者血清池中IgE和IgG特异性结合的多肽片段,定位出卵白蛋白的4个B细胞IgE线性表位和4个IgG线性表位。其中,4个B细胞IgE线性表位分别为AA84~91(LRDILNQI)、AA129~139(GLEPINFQTAA)、AA213~220(YQIGLFRV)和AA360~370(RADHPFLFCIK),4个B细胞IgG线性表位分别为AA27~37(NIFYC PIAIMS)、AA72~82(AQCGTSVNVHS)、AA291~301(KYNLTSVLMAM)和AA360~370(RADHPFLFCIK)。在这两种表位中,AA360~370(RADHPFLFCIK)为它们共有的表位。另外,AA84~91、AA213~220和AA360~370是IgE线性表位中未见报道的新表位,AA27~37、AA72~82、AA291~301和AA360~370是IgG线性表位中未见报道的新表位。(5)根据肽扫描定位原理,利用斑点杂交法筛选出与溶菌酶过敏患者血清池中IgE和IgG特异性结合的多肽片段,定位出溶菌酶的7个B细胞IgE线性表位和6个IgG线性表位。其中,7个B细胞IgE线性表位分别为AA3~13(FGR CELAAAMK)、AA18~22(DNYRG)、AA30~34(CAAKF)、AA63~73(WCNDGRT PGSR)、AA75~79(LCNIP)、AA84~91(LSSDITAS)和AA115~117(CKG),6个B细胞IgG线性表位分别为AA3~13(FGRCELAAAMK)、AA31~36(AAKFE S)、AA57~64(INSRWWCN)、AA75~79(LCNIP)、AA88~93(ITASVN)和AA115~117(CKG)。在这两种表位中,AA3~13(FGRCELAAAMK)、AA31~34(AAKF)、AA75~79(LCNIP)、AA88~91(ITAS)和AA115~117(CKG)为它们共有的表位。另外,AA30~34和AA84~91是IgE线性表位中未见报道的新表位,AA3~13、AA31~36、AA57~64、AA75~79、AA88~93和AA115~117是IgG线性表位中未见报道的新表位。(6)根据肽扫描定位原理,使用10个溶菌酶过敏患者血清样本,利用斑点杂交法分别筛选出与单个血清样本中IgE和IgG特异性结合的多肽片段,定位出溶菌酶的3个主要B细胞IgE线性表位和2个IgG线性表位。其中,3个主要B细胞IgE线性表位分别为AA24~34(SLGNWVCAAKF)、AA81~91(SALLS SDITAS)和AA102~112(GNGMNAWVAWR),2个主要B细胞IgG线性表位分别为AA30~37(CAAKFESN)和AA84~94(LSSDITASVNC)。在这两种主要表位中,AA30~34(CAAKF)和AA84~91(LSSDITAS)为它们共有的表位。(7)使用Bioedit软件预测溶菌酶的主要B细胞线性表位中的关键氨基酸。预测出了21个IgE线性表位中的关键氨基酸,分别为24S、25L、28W、29V、31~32A、34F、81S、82A、83~84L、85~86S、90A、91S、105M、107A、108W、109V、110A和111W。预测出了6个IgG线性表位中的关键氨基酸,分别为34F、35E、36S、85~86S和91S。总之,本论文使用中国鸡蛋过敏患者血清较全面解析了鸡蛋清中主要致敏原卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的IgE和IgG线性表位以及溶菌酶的主要表位,填补了国内空白,为进一步深刻理解鸡蛋致敏原结构与致敏性提供了重要的信息。