妇女到了更年期和绝经期后,由于卵巢功能的退化,雌激素的分泌水平下降,导致雌激素的靶器官产生一系列与雌激素缺乏相关的病理改变如更年期综合症、骨质疏松,以及冠状动脉粥样硬化性心脏病、神经退行性病变如Alzheimer病或老年性痴呆的发病率升高等.我们采用盲法从二十个天然产物样品中筛选具有较强雌激素样作用的新型植物雌激素,并研究其作用机理,为新型植物雌激素的临床应用奠定理论基础.一、植物雌激素的筛选;采用MTT法,通过测定MCF7细胞在不同浓度样品作用下的相对增殖效率(RPE),检测二十个植物提取物样品的雌激素样活性.根据对MCF7细胞增殖的影响的差异将样品分为三类:(Ⅰ)对MCF7细胞的增殖没有显著影响,(Ⅱ)有抑制作用,(Ⅲ)有促进作用.结果表明:1.酚基对雌激素样活性很重要;2.取代基团不同可能完全改变分子的作用;3.植物雌激素的作用具有组织特异性.选取第Ⅲ类样品中的Hu-7-Pallidol进一步研究其作用机理.二、Pallidol作用机理的研究.对于金雀异黄素(Genistein)的作用机理已经有很多报道,为了解Pallidol在细胞水平的作用机理,以及Genistein为对照,应用MTT法测定Pallidol和Genistein对细胞增殖的影响;应用竞争性放射配体结合实验检测它们与雌二醇(estradiol,E2)竞争性结合雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的能力,并利用报告基因检测它们是否具有模拟雌激素与ER结合后的反式激活作用.以上结果显示:1.Pallidol在10<-10>M-10<-6>M的浓度范围内通过ER依赖性途径促进MCF7的增殖;2.Pallidol在10<-5>M时可能通过ER非依赖性途径对细胞的增殖产生抑制作用;3.Pallidol对小鼠成骨细胞的增殖没有显著影响;4.Pallidol在MCF7细胞中没有拮抗雌激素的作用;5.Pallidol可与ER高亲和性结合,通过与ERE结合激活下游基因的转录.