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弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中(non-hodgkin’s lymphoma，NHL)中最频发的类型。联合化疗的应用提高了DLBCL治疗效果，使50％的DLBCL患者获得长期治愈；但仍有50％的患者其疗效不满意，其原因尚未清楚。因此，寻找这些难治愈患者的原因成为很多学者研究的热点。目前，根据B细胞的来源不同将DLBCL分为生发中心B细胞样(germinal center B-cell-like，GCB)型和非生发中心B细胞样(non-germinal center B-cell-like，non-GCB)型两种。GCB型预后显著优于non-GCB型；同时也证实出现bcl-2基因重排是GC来源。用免疫组化方法来探索B细胞来源时，国外有用CD10、BCL-6和MUM-1三者联合进行，国内有关该研究的有效性报道甚少。本研究通过CD10、BCL-6和MUM-1联合检测对DLBCL进行亚分类以探讨其B细胞的来源，并通过与bcl-2基因重排检测结果比较以探讨免疫分型的有效性，希望为DLBCL的治疗和预后判断提供科学的依据。材料与方法1．收集郑州大学第一附属医院病理科和河南省人民医院病理科满足试验设计要求的淋巴结DLBCL40例。经切片、HE染色及免疫组化染色，有两位病理专家重新阅片确定诊断，整理其临床资料和石蜡包埋组织标本。2．40例淋巴结DLBCL石蜡包埋组织抽提DNA，应用PCR技术检测bcl-2基因重排同时应用SP免疫组化方法检测CD10、BCL-6和MUM-1的表达，并按照文献GCB型和non-GCB型的免疫表型标准将40例淋巴结DLBCL进行亚分类。观察免疫组化结果及亚分型与bcl-2基因重排亚分型二者在区分B细胞来源上有无差别。结果1．组织病理学分型：40例淋巴结DLBCL的形态学变型有：中心母细胞型(centroblasticvariant，CB)35例，占87.5％(35／40)；免疫母细胞型(immunoblastic variant，HB)3例，占7.5％(3／40)；间变大细胞型(anaplastic variant，ALCL)1例，富于T细胞／组织细胞型(T-cell／histocyte-rich variant，TRBL)1例。后两者各占2.5％(1／40)。2．结内DLBCL CD10，BCU-6和MUM-1的表达单克隆抗体CD10阳性表达定位于胞膜，而BCL-6和MUM-1阳性表达均定位于胞核。40例结内DLBCL中CD10，BCL-6和MUM-1阳性病例数分别为11、16、29例，阳性率分别为27.5％、40.0％和72.5％。其中，CD10+／13CL-6+7例，CD10+／MUM-1+6例，BCL-6+／MUM-1+12例，CD10+／BCL-6+／MUM-1+4例。3．DLBCL免疫组化亚分类结果按照标准40例LN-DLBCL亚分类如下：GCB型CD10+／BCL-6+／-／MUM-1+／-11例，CD10-／BCL-6+／MUM-1-2例。non-GCB型CD10-／BCL-64／MUM-1+／-19例，CD10-／BCL-6+／MUM-1+8例。最后结果GCB型13例，占32.5％(13／40)，non-GCB型27例。占67.5％(27／40)。4．结内DLBCL中bcl-2基因重排40例中9例出现bcl-2基因重排，占22.5％(9／40)；其中mbr／JH重排8例，占20.0％(8／40)，mcr／JH和icr／JH重排各1例，各占2.5％(1／40)。其中l例出现mbr／JH和mcr／JH双重重排占2.5％(1／40)。DLBCL中出现bcl-2基因重排视为生发中心来源，则40例结内DLBCL中GCB型9例，non-GCB型31例。5．免疫组化亚分类与基因重排检测结果的比较免疫学亚分类和基因重排检测结果两种方法区分GCB型和non-GCB型检测结果无显著性差异(P＞0.05)。单独BCL-6蛋白表达与bel-2重排无相关性(P＞0.05)，CD10蛋白表达与bcl-2重排正相关关系(r=0.339，P＜0.05)，MUM-1蛋白表达与bel-2重排成负相关(r=-0.339，P＜0.05)。6．免疫组化与基因重排同时应用CD10、BCL-6和MUM-1免疫组化GCB型检测率37.5％(15／40)，基因重排GCB型检测率的22.5％(9／40)，两种方法结合GCB型检测率提高到40％(16／40)。结论1．BCL-6、CD10和MUM-1三种抗体结合可区分DLBCL中B细胞的来源并对DLBCL进行亚分类，指导临床预后。2．免疫组化和基因重排对DLBCL进行亚分类，二者亚分类结果相同。CD10是较好的生发中心细胞标记物，单独应用可以进行DLBCL亚分类，但须与其他抗体结合以提高GCB型检出率。3．BCL-6、CD10和MUM-1免疫组化检测对DLBCL亚分类简单易行。4．BCL-6、CD10和MUM-1免疫组化和bcl-2基因重排结合可以提高GCB型的检出率。