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目的:研究成年雄性SD大鼠嗅球损伤后对SVZ细胞增殖及其NMDA受体亚单位表达的影响。 方法:正常成年雄性SD大鼠80只,体重250-300 g,随机分为4组,即正常组、假手术组、单侧损伤组、双侧损伤组。使用KOPF脑立体定位仪,直视打开嗅球上方颅骨,按Swanson大鼠脑图谱取出嗅球,以明胶海绵充填于原嗅球部位制作嗅球损伤模型,术后分2W、4W、8W、12W四个时间点取脑。每个时间点的大鼠在处死前腹腔注射BrdU,给药8次,每次50mg/kg,每12h给1次,连续4d,动物继续存活7d后分别灌注取脑。进行石蜡切片,各组行免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色观察NMDA亚单位NR1、NR2A的变化,以及使用免疫荧光技术观察神经干细胞(Nestin标记)、增殖细胞(Brdu标记)。用ImagePro图像处理与分析系统进行光镜下图像分析。每组选取5张图片,每张图片选择相同的面积进行阳性细胞计数。 结果使用SPSS13.0统计软件进行统计分析,数据以平均数±标准差(mean±SD)表示,多组间比较行单因素方差分析(one-way ANOVA),各时间点之间使用单因素方差分析,方差齐采用LSD法,方差不齐采用Dunnett T3法,以P<0.05表示差异有统计学意义。 结果:1.Nestin免疫荧光结果显示,在嗅球损伤2W后阳性细胞数开始增加,单侧损伤组、双侧损伤组较正常组和假手术组升高(P<0.05);单侧损伤组较双侧损伤组细胞数多(P<0.05),而正常组与假手术组阳性细胞数相比差异无统计学意义(P>0.05)。到了4W后嗅球损伤组阳性细胞数达到最大值,单侧损伤组、双侧损伤组较正常组和假手术组升高(P<0.05);单侧损伤组较双侧损伤组细胞数多(P<0.05),正常组与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。在8W和12W时阳性细胞在正常组水平,各组差异无统计学意义(P>0.05)。 2.BrdU免疫荧光结果显示,2W后细胞数增加,嗅球损伤组与正常组和假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。在4W后,SVZ增殖细胞数达到最高峰,单侧损伤组、双侧损伤组较正常组和假手术组升高(P<0.05);单侧损伤组较双侧损伤组阳性细胞数多(P<0.05),正常组与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。8W时细胞增殖速度缓慢下降,嗅球损伤组与正常组和假手术组相比增殖细胞较多(P<0.05),但是单侧损伤组与双侧损伤组相比无统计学意义(P>0.05),12W时细胞增殖数在正常组水平,各组相比差异无统计学意义(P>0.05)。正常组和假手术组从2W到12W阳性细胞数均未见明显改变。 3.免疫组织化学的结果显示在嗅球损伤后大鼠各时间点SVZ中的细胞上均表达有NR1、NR2A; NR1与NR2A的表达呈现基本一致变化趋势。嗅球损伤组可见NR1、NR2A在2W后阳性细胞数增长,嗅球损伤组与正常组和假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05),4W后细胞数上升到最大,单侧损伤组、双侧损伤组较正常组和假手术组升高(P<0.05);单侧损伤组较双侧损伤组细胞数多(P<0.05),正常组与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。到了8W后细胞数迅速下降,嗅球损伤组与正常组和假手术组相比增殖细胞较多(P<0.05),但是单侧损伤组与双侧损伤组相比无统计学意义(P>0.05),12W后细胞数恢复至正常组水平(P>0.05)。正常组和假手术组从2W到12W阳性细胞数均未见明显改变。 结论:1.本研究结果显示嗅球损伤后SVZ增殖细胞和神经干细胞增加明显,同时观察到NMDA受体亚单位NR1、NR2A阳性细胞数增加。2.SVZ的神经生发活动可能并不依赖于嗅球的存在,NR1、NR2A可能参与SVZ细胞增殖过程。