【摘 要】
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本试验以梅花鹿二杠茸为研究材料,通过组织学解剖,取得鹿茸的间充质,经过胰酶消化,培养鹿茸间充质细胞,成功构建了鹿茸间充质细胞的cDNA文库。用TRIZOL提取鹿茸间充质细胞总R
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本试验以梅花鹿二杠茸为研究材料,通过组织学解剖,取得鹿茸的间充质,经过胰酶消化,培养鹿茸间充质细胞,成功构建了鹿茸间充质细胞的cDNA文库。用TRIZOL提取鹿茸间充质细胞总RNA,反转录成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用SfiI酶切;将酶切产物进行分级分离,回收500bp以上的cDNA组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生初级文库;鉴定文库的滴度后,进行文库扩增。随机挑取若干个噬菌斑,进行PCR扩增,检测所构建的cDNA文库的质量。经测定该文库初始滴度为3.0×105pfu/ml,扩增后滴度为6.0×108pfu/ml。插入片段长度为大于500bp,也有1000bp以上的片断。反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录,得到的cDNA是完整的,完全符合cDNA文库的要求。鹿茸间充质细胞全长cDNA文库的成功构建,为我们钓取鹿茸间充质特异基因研究奠定了坚实的基础,同时对鹿茸的再生机理方面也会有所帮助。
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