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聚合酶链式反应(PCR)是一种体外扩增目标DNA片段的重要技术,在现代生物学以及医学诊断等方面具有广泛的应用。然而PCR存在着低特异性及低灵敏性的问题,容易产生非特异性扩增。热启动PCR是一种非常有效的防止这些非特异性扩增产生的技术。但是现有的一些热启动方法或是由于操作繁琐,或是由于成本较高,不利于大规模应用,因此探索一种更为简便有效的热启动PCR扩增策略就显得很必要。 量子点是一种准零维的纳米材料,由于出色的化学和物理特性而受到越来越多的关注。相关研究表明,当水溶性的CdTe量子点加入后,Pfu DNA聚合酶的PCR体系表现出良好的热启动效应。那么量子点对Pfu聚合酶的调控能力是否也可作用于其它类型的聚合酶就有待进一步研究。 在本课题的研究中,首先探究了量子点与四种高保真聚合酶和三种普通Taq DNA聚合酶的热启动效应,结果发现在测试的四种高保真聚合酶体系中,量子点均可引发显著的热启动扩增效应,即使PCR混合液在50℃下温浴2h依然有清晰的特异性目的条带产生。相反的,量子点在三种普通聚合酶体系中均未表现出明显的作用。随后利用实时荧光定量PCR(Q-PCR)来进一步观察量子点的热启动效果,发现量子点的加入显著提高了Pfu聚合酶热启动Q-PCR体系的灵敏性和特异性,同对照组相比即使在低模板浓度下,PCR混合液在50℃下温浴1h依然可以获得清晰的目的条带,其热启动效果可媲美商品化的热启动聚合酶TaqHS。然而,量子点的加入对于Taq聚合酶热启动Q-PCR无明显影响。通过对基于量子点热启动PCR体系的保真性检验的结果表明,即使在50℃下温浴1h,量子点的加入也没有显著降低Pfu聚合酶的保真性。最后对量子点的作用机理进行了初步探讨,琼脂糖凝胶电泳的结果表明,Pfu DNA聚合酶体系热启动效应的产生并非简单地由聚合酶浓度的降低所引发,而是由于量子点同Pfu DNA聚合酶之间的相互作用,并且这种相互作用能力要比量子点同Taq DNA聚合酶更加强烈,这也是量子点在高保真聚合酶体系内产生热启动扩增效应而不是普通聚合酶体系的主要原因。 综上所述,基于量子点的热启动PCR具有简单、普适、经济等特点,可以为后续相关研究提供较好的技术支持。