【摘 要】
:
蓝舌病(Bluetongue,BT)是一种由呼肠孤病毒科、环状病毒属的蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)经库蠓等节肢昆虫叮咬反刍动物导致的传染病。全世界现已发现BTV有27种血清型,各血清型之间没有交叉保护作用,且病畜感染血清型不同或个体差异不同所表现的临床症状不同,给蓝舌病的防控和多价疫苗的研究带来了挑战。研发有效的蓝舌病检测诊断试剂盒对蓝舌病的防控意义重大。BTV的VP7蛋白
【基金项目】
:
“十三五”国家重点研发计划项目——烈性外来动物疫病综合防控技术国际科技合作与联合研发(2017YFD0502306);
论文部分内容阅读
蓝舌病(Bluetongue,BT)是一种由呼肠孤病毒科、环状病毒属的蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)经库蠓等节肢昆虫叮咬反刍动物导致的传染病。全世界现已发现BTV有27种血清型,各血清型之间没有交叉保护作用,且病畜感染血清型不同或个体差异不同所表现的临床症状不同,给蓝舌病的防控和多价疫苗的研究带来了挑战。研发有效的蓝舌病检测诊断试剂盒对蓝舌病的防控意义重大。BTV的VP7蛋白具有群特异性抗原决定簇,能诱导机体产生免疫反应,故对VP7蛋白的研究尤为重要。本研究在分离鉴定一株BTV-14型毒株的基础上,进行VP7蛋白的真核表达,单克隆抗体的制备并初步建立竞争ELISA检测方法。1.BTV-14的分离与鉴定本研究对某羊养殖场疑似感染BT的个体采集血液样品进行病毒的分离和鉴定。将送检样品进行BTV抗体检测并接种BHK-21细胞进行盲传,对出现细胞病变(CPE)的样品进行针对S7基因和L2基因的RT-PCR检测、间接免疫荧光检测及中和试验。结果显示,样品检测结果显示部分样品呈现BTV抗体阳性,接种BHK-21细胞都产生了特异性的CPE,而且能被BTV-14标准阳性血清特异性中和,RT-PCR可扩增出长度为1080 bp的S7基因片段、850 bp和1581 bp的L2基因片段,将L2基因序列测序后通过BLAST检索NCBI的GenBank结果与BTV-14的序列相一致,说明我国新疆地区存在BTV-14。2.BTV-14的VP7蛋白的真核表达和单克隆抗体制备根据BTV-14的S7基因开放阅读框序列设计并合成一对特异性引物,将S7基因编码区克隆至pFastBacHTA载体中构建重组质粒,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中获得重组穿梭质粒,接着把重组穿梭质粒转染至sf9细胞中表达获得VP7重组蛋白。同时用蔗糖梯度离心法纯化BTV-14全病毒,按照免疫程序免疫Balb/c小鼠,选取效价最高的免疫小鼠在融合前三天加强免疫,细胞融合前夜制备饲养细胞,取免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合。将真核表达的VP7蛋白作为筛选抗原,建立间接ELISA检测方法筛选阳性克隆,共筛选出4株能产生针对VP7蛋白抗体的杂交瘤细胞。3.蓝舌病毒竞争ELISA检测方法的初步建立把VP7作为包被抗原,制备的单抗作为竞争抗体建立BTV的c-ELISA检测方法。经优化反应条件设定为:抗原包被浓度为1 μg/孔;4℃包被过夜;5%BSA在37℃封闭2 h;待检血清5倍稀释;竞争单抗400倍稀释;酶标二抗5000倍稀释,初步建立BTV的c-ELISA方法。该方法具有特异性,可区分口蹄疫(FMD)、小反刍兽疫(PPR)抗体阳性血清样品。综上所述,本研究分离到一株蓝舌病毒并鉴定为14型,随后扩增BTV-14的S7基因编码区,经sf9细胞表达获得VP7蛋白作为包被抗原,筛选到4株能识别VP7蛋白的单克隆抗体,初步建立蓝舌病的c-ELISA检测方法,为研制蓝舌病的临床快速诊断方法奠定了基础。
其他文献
我国自改革开放以来,经济迅猛发展,随着国家城市化、工业化、现代化进程的不断推进,越来越多的农村劳动力流动到城市当中,发生大规模的社会流动,这也导致了农村留守青少年这一社会流动的“衍生品”产生。这些农村留守青少年在父母外出打工后,面临着挑战,经过调查发现,农村留守青少年整体具有抗压能力弱、易出现偏差行为以及情绪问题多等群体特征。本研究运用定性研究为主、定量研究为辅的研究方法,通过在研究地开展半结构式
我国正大力推广装配式建筑。作为装配式混凝土结构中最重要的体系,装配式混凝土框架结构在遭遇意外的极端荷载,例如爆炸、撞击、火灾时,其局部构件的损伤或破坏可能引发整体结构的倒塌,引发严重后果。与传统现浇混凝土框架相比,装配式混凝土框架存在节点薄弱、拼缝及节点处受力复杂、整体性差等问题,发生连续倒塌的风险性更大。因此,研究如何防止装配式混凝土框架结构发生连续倒塌,具有重要的科研价值和工程意义。本文在分析
智能小车是目前常见的运动载体,随着人工智能和计算机技术的发展,与其相关的研究也受到越来越多的关注。目前,智能小车的主要研究方向为定位,路线规划,运动控制等内容,其中运动控制是智能小车相关领域研究的基础。常用的控制方法在解决智能小车轨迹跟踪问题上仍然存在响应速度慢,抗干扰性差等不足。本文主要针对上述缺点,设计控制器抵消智能小车系统在轨迹跟踪时的不稳定因素。首先,本文提出一种智能小车轨迹跟踪的多维泰勒
由于长期的物理和化学风化作用,大量不连续且不均匀的节理存在于岩体结构中,使得天然状态下的岩体成为具有复杂特性的地质体。当冲击荷载或爆炸作用产生的应力波在岩体结构中传播时,不连续的节理面对应力波传播规律产生影响,造成不同程度的应力波衰减现象。同时,节理构造改变了岩体结构的强度和刚度,极大程度地威胁到岩土工程的安全性。人们需要更深刻地认识节理构造对岩体的影响,理解和评价岩体结构的动力学响应,从而开展对
复杂网络能够用来描述社会和自然界中的许多系统.如万维网、因特网、细胞网、国际机场网、生态网、科学家合作网等等.其中网络结点表示系统的元素,两点间的连线表示元素间的相互关系.无标度特性是复杂网络的一个重大发现.实证研究表明,众多实际网络都具有无标度特性,即:网络的度分布P(k)具有幂律尾部,即P(k)~k-γ(对于大k).为了研究这类网络,已经有许多网络演化模型被提出了本文主要研究层次网络和伪分形网
目的:通过肾脏超声微泡造影(contrast-enhanced ultrasonography,CEUS)及其定量分析技术观察感染性休克患者应用特利加压素后肾皮质区域血流灌注情况。旨在探讨特利加压素对感染性休克患者肾脏血流灌注的影响。方法:(1)选取2019年9月至2020年1月,2020年5月至6月东南大学附属中大医院重症医学科收治的符合入选条件的感染性休克患者为研究对象,并随机分为对照组和实验
异构信息网络kNN查询在数据挖掘领域有着广泛的应用,如链接预测、信息检索、个性化推荐等。现有的相关算法是给定一个查询对象,返回k个目标类型对象。而实际上,很多需求是查询与多个对象相关的实体,即多对象kNN查询。为了解决这个问题,本文针对异构信息网络多对象kNN查询算法开展相关研究工作。根据查询语义的不同,本文提出两种查询框架:基于特定语义的多对象kNN查询(Specific Semantic ba
云计算是新一代不可或缺的互联网基础设施,极大地支撑和加速了大数据与人工智能的发展。作为云计算技术的延伸,边缘计算提供高带宽、低延迟、高安全的计算与存储服务,成为云计算的有益补充。在目前万物互联和海量数据产生的背景下,数据计算与存储的需求迅猛增长,越来越依赖于云计算和边缘计算所提供的资源。面对当今纷繁复杂的云计算市场,各云提供商的收费项目、定价策略、及其云服务的工作性能千差万别,并且单云模式存在着供
近年来,癌症的发病率越来越高。光热治疗具有微创、副作用小、高效等特点,被作为一种新兴治疗的方法逐渐引起了人们的广泛关注。光热治疗是通过光热试剂(PTAs)吸收近红外(NIR)光将光能转化为热能,在局部产生高热从而杀死肿瘤细胞。因此光热治疗的前提是开发具有光热性能好的光热试剂。因为水和血细胞对近红外光的吸收很少,这使得光线可以穿透深部组织从而激发PTAs,对附近健康组织的伤害降到最低,因此PTAs需