猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）是猪烈性传染病猪瘟（Classical swine fever，CSF）的病原菌，由于猪瘟具有高发病率和死亡率，能对养猪业造成巨大损失的特点，而被世界动物卫生组织（Office International des Epizooties，OIE）和陆生动物法典列为法定报告的动物传染病。CSFV的非结构蛋白 NS3具有多种蛋白酶功能。研究发现，NS3能够与CSFV RNA的3’UTR以及IRES结合，促进病毒的转录和翻译。NS2-3复合体能够影响病毒的复制和病毒粒子组装。此外，NS3蛋白在细胞中的积累，会导致细胞病变。NS3由于能够引起宿主产生高水平的中和抗体，因而也被认为是能够替代E2的潜在疫苗研发对象。　　本文为研究NS3蛋白对宿主的致病机制以及与宿主细胞蛋白的相互作用，采用酵母双杂交技术，对猪外周血单核细胞中能与NS3蛋白进行互作的蛋白进行筛选，得到如下研究结果：　　（1）利用RT-PCR扩增得到NS3基因，并成功构建pGBKT7-NS3重组诱饵质粒。将重组质粒转化 Y2HGold酵母感受态细胞，经过检测表明其无自激活作用，并且对酵母细胞没有毒性作用。对Y2HGold(pGBKT7-NS3)表达蛋白用Western Blot方法进行检测，能够得到约100 kDa产物，说明NS3在酵母细胞中能够表达，能够用于文库筛选。　　（2）对猪外周血进行分离，得到单核细胞，提取其总 RNA。利用 SMART技术合成cDNA第一链和ds cDNA。利用CHROMA SPIN+TE-400对ds cDNA进行纯化，去除200 bp以下的短片段后，与pGADT7-Rec共转化Y187酵母感受态细胞，制备cDNA文库。经过检测，发现文库滴度为1.2×107cfu/mL，文库库容为6.0×108。随机挑取23个酵母菌落进行文库多态性检测，经过电泳检测发现，文库插入片段分布在500 bp～3000 bp之间，其中主要集中在1000 bp～1500 bp，重组率为91％。　　（3）利用 pGBKT7-NS3诱饵质粒对猪外周血单核细胞 cDNA文库进行筛选后，共获得8个与 NS3存在潜在互作的目的蛋白，分别为 HAUS2，CTSV，β-Actin，PSMB10，LDHB，MARC1，ASB3和ETFA。