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目的:探讨异体反应性NK细胞在非清髓骨髓移植中诱导供者特异性耐受的作用机理。方法:以近交系C57BL/6J(H-2Db)雌鼠为受鼠,C57BL/6J×BALB/c杂交F1代(H2Db/d)雌鼠为供鼠,以氟达拉滨与环磷酰胺为移植前的非清髓化疗方案,进行H-2单倍体骨髓移植。应用高强度磁珠分选系统纯化供鼠NK细胞亚群。分选前后NK细胞的纯度用流式细胞仪检测;采用LDH释放法检测磁珠分选后的NK细胞对Yac-1淋巴瘤细胞、自体及异体淋巴细胞的杀伤。按照对C57小鼠预处理条件的不同分为两组:A组先行化疗预处理,再行骨髓移植;B组行化疗预处理后,输注供鼠NK细胞的同时行骨髓移植。用流式细胞仪检测移植后90天内A、B两组小鼠脾脏和骨髓中H-2Dd细胞比例,检测供体嵌合情况;以F1代小鼠脾细胞作为刺激细胞,移植后7天、14天、21天、28天的两组小鼠及正常C57小鼠的脾细胞作为效应细胞行单向混合淋巴细胞培养;以F1代小鼠脾细胞作为刺激细胞,以正常C57小鼠的脾细胞作为效应细胞,并分别加入移植后23天A组和B组的不同浓度CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+CD25+细胞与CD4+CD25-细胞行单向混合淋巴细胞培养;用流式细胞法比较移植后14天、23天A组和B组脾脏的调节性T细胞的变化;用实时荧光定量RT-PCR法检测移植后23天A组和B组脾脏、胸腺CD4+CD25+和CD4+CD25-中IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β、IFN-γ、FoxP3的mRNA水平;应用ELISA法检测在供受者混合淋巴细胞培养体系中加入A组与B组不同剂量的CD4+细胞、CD4+CD25+细胞后,其上清中IFN-γ的分泌量;采用A组和B组移植后14天的胸腺分选的CD11c+细胞与正常C57小鼠的脾细胞分选的CD3+细胞体外共孵育培养5天,采用流式细胞法比较两组调节性T细胞的变化并应用ELISA法检测其对供者特异性IFN-γ分泌情况的影响。结果:分选前脾脏单个核细胞中NK细胞的比例为(19.85±4.27)%,分选后NK细胞的比例为(74.63±5.5)%;NK细胞亚型对Yac-1细胞的杀伤活性为(65.52±8.76)%;F1代小鼠纯化NK细胞亚型对异体C57小鼠淋巴细胞的杀伤活性为(60.18±1.03)%;而受体的NK细胞对自体的淋巴细胞无杀伤活性,说明异体反应性NK细胞具有杀伤活性。B组与A组比较,H-2Dd细胞比例明显增高,移植后28天A组小鼠脾脏嵌合率为(7.50±0.70)%,骨髓中供体细胞嵌合率为(10.20±2.40)%,B组小鼠脾脏嵌合率为(46.20±5.00)%,骨髓嵌合率为(28.7±5.9)%,两组之间比较有统计学意义,P<0.01,两组在60天时仍有差别,在90天时B组脾脏H-2Dd细胞比仍高于A组,而骨髓中的嵌合率无明显差异;混合淋巴细胞培养结果显示,与正常C57小鼠相比,A、B两组小鼠的淋巴细胞增殖比例降低,而B组小鼠增殖比例的降低程度比A组要高,移植后28天正常C57小鼠的刺激指数是(1.48±0.23),A组是(1.14±0.13),B组是(0.91±0.05),组间比较有统计学意义,P<0.01;在以F1代小鼠淋巴细胞与正常C57小鼠的淋巴细胞进行的混合淋巴细胞培养中加入移植后23天两组不同浓度的的CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+CD25+细胞与CD4+CD25-细胞,结果表明其中起增殖抑制作用的细胞是CD4+细胞而不是CD8+细胞,并且是CD4+CD25+细胞而不是CD4+CD25-细胞。流式细胞检测结果示在移植后23天B组脾脏出现CD4+CD25+CD127-Treg细胞,而A组则无。实时荧光定量RT-PCR法结果显示:A组脾脏和胸腺的IFN-γ的含量均比B组高,而B组的FoxP3比A组高,两两比较较有统计学意义,P<0.05;此外在脾脏A组的IL-2较B组高,而在胸腺则表现为A组的IL-4较B组高,两组之间比较具有统计学意义,P<0.05。体外诱导的结果显示来自B组胸腺的CD11c+细胞可诱导C57小鼠产生CD4+CD25+CD127-Treg细胞,并且在F1与C57小鼠淋巴细胞共孵育时加入该Treg细胞,可使其IFN-γ分泌减少。结论:异体反应性NK细胞在单倍体非清髓骨髓移植中促进移植物的植入,并诱导宿主免疫耐受的形成。在这一过程中,由胸腺CD11c+细胞诱生的Treg细胞参与并起了重要的作用。