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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)由于其特异的杀虫方式,高效的杀虫效果,而成为了一种重要的杀虫微生物,其杀虫基因通常是由大质粒所携带的,因此,对质粒的测序及其研究对于研究质粒与杀虫蛋白间的关系,认识质粒在细菌生长发育中的作用具有重要意义。本研究利用454及Solexa高通量测序技术,完成了HD73菌株中的两个大质粒(携带cry1Ac基因的pHT73质粒及pAW64质粒)的序列拼接与验证,结果表明,pHT73质粒大小为77437bp,具有77个ORF,RT-PCR的分析表明,在检测的63个ORF中61个ORF在T-1、T0、T7三个时期均有转录活性(T0为对数期终止);pAW64质粒大小为76490bp,具有93个ORF,RT-PCR分析表明,其中91个ORF在T-1、T0、T7三个时期均有转录活性。同时,本研究还完成了HD73菌株中4个小质粒的拼接,结果表明,p1质粒大小为11769bp,具有26个ORF;p2质粒大小为8513bp,具有16个ORF;p3质粒大小为7635bp,具有10个ORF;p4质粒大小为8241bp,具有10个ORF,并完成了所有质粒编码基因的注释。为了研究质粒对菌株生长发育等性状的影响,本研究利用高温培养诱导质粒缺失,结合PCR鉴定的方法,以HD73菌株作为出发菌株,构建了4株不同质粒缺失突变体,并从实验室保存菌株中鉴定出了2株质粒缺失突变体,通过对野生型及六株突变体的多种性状比较分析表明,六种质粒的缺失类型在菌体的生长速度、芽胞萌发、芽胞产量上没有明显区别,但是,质粒的缺失会对菌体颜色及菌体的沉降速度产生影响,研究发现,p4、pHT73质粒的同时缺失会导致菌体变黄,而p3、pAW63、pHT73质粒的同时缺失具有促进菌体沉降的作用。为了获得仅有cry1Ac基因缺失的无晶体突变株及研究pHT73质粒对cry1Ac基因表达的影响,本研究利用同源重组的方式,构建了cry1Ac基因缺失的HD△cry1Ac突变体,通过对HD73、pHT73质粒缺失的HD73-T4及HD△cry1Ac菌株多种性状比较,发现cry1Ac基因的缺失对菌体生长状况、生长速度、芽胞萌发、芽胞产量没有明显影响。将融合表达载体pHT315-cry1Ac-gfp转入到HD73-T4、HD△cry1Ac菌株中,通过激光共聚焦显微镜的观察表明,HD73-T4与HD△cry1Ac菌株中cry1Ac基因表达没有明显差异。本研究完成了HD73菌株中pHT73、pAW64、p1、p2、p3、p4质粒的序列拼接,为深入研究它们的功能与作用提供了基础。