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目的:
浸润和转移是恶性肿瘤的两大最主要特征。越来越多研究表明microRNA在抑制恶性肿瘤浸润和转移方面发挥着重要的作用。本实验在人胃癌标本及胃癌细胞系中检测microRNA-145(miR-145)的表达情况并进行miR-145体内外转染实验，验证其作用及调控的靶基因，探讨其调控胃癌浸润、转移的分子机制。
方法:
采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测136例胃癌和17例非肿瘤胃黏膜组织及4种胃癌细胞株中miR-145的表达情况。为验证其生物学功能，胃癌细胞株BGC823和SGC7901转染miR-145precursor、anti-miR-145inhibitor及negativecontrol进行迁移、浸润和增殖实验。通过使用miR-145慢病毒表达载体进行体内动物实验，以观察其体内外抑制胃癌细胞的局部浸润和远处转移的能力。通过荧光素酶检测和westernblot实验，验证miR-145调控的靶基因。
结果:
(1)RT-qPCR显示:136例胃癌组织miR-145的表达水平较17例非肿瘤胃黏膜组织下调32.35倍，胃癌转移灶miR-145的表达水平较原发灶进一步下调约2.62倍。同时，4种胃癌细胞miR-145的表达水平较正常胃粘膜细胞分别下调2-31倍，差异均有统计学意义(P＜0.05).
(2)细胞实验显示:miR-145precursor转染组较对照组细胞的迁移和浸润能力明显降低。随后anti-miR-145inhibitor和inhibitorcontrol的转染实验发现，anti-miR-145inhibitor组细胞的迁移和浸润能力又明显增加，说明miR-145具有抑制胃癌细胞BGC823和SGC7901的迁移和浸润能力。miR-145对胃癌细胞的生长和增殖没有明显的作用(P＞0.05)。
(3)体内动物实验显示:体内局部浸润实验中转染miR-145慢病毒组的裸鼠瘤体包膜完整，而对照组出现了瘤体周围的局部浸润现象。血源性转移实验中转染miR-145慢病毒组(2/5)和对照组(5/5)的裸鼠都出现了远处肺脏的转移，但miR-145组肺转移灶明显少于对照组，差异具有统计学意义。这提示miR-145具有体内抑制胃癌浸润、转移的能力。
(4)N-Cadherin荧光素酶载体连同miR-145precursor一起转染到胃癌细胞BGC823和SGC7901后，荧光素酶检测结果显示:miR-145组的荧光值表达比对照组显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。另外westernblot结果显示:miR-145转染后，与对照组相比，N-Cadherin蛋白表达显著降低。这提示N-Cadherin是miR-145的直接靶基因。
(5)基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达随着miR-145的表达上调和N-Cadherin的沉默而出现下调。在随后的细胞化学染色实验中，MMP-9在N-CadherinsiRNA转染的细胞相比对照组中蛋白表达量明显降低。这提示miR-145通过下调其直接靶基因N-Cadherin，进而下调MMP-9表达发挥抑制胃癌浸润和转移的作用。
结论:
miR-145在胃癌组织和多种胃癌细胞系中表达下调。体内和体外实验均提示miR-145在胃癌进展过程中发挥抑制胃癌浸润、转移的作用。miR-145通过调控其靶基因N-Cadherin和下游的效应基因MMP-9发挥抑制胃癌的浸润和转移的作用。