白藜芦醇对喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的增强作用及其机制的研究

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目的:研究顺铂和白藜芦醇联合用药或单独用药对Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。探讨白藜芦醇提高喉癌Hep-2细胞株对顺铂敏感性的作用及其机制。方法:(1) Hep-2喉癌细胞随机分为空白对照组及顺铂组(终浓度分别为3、6、12和24μmol L-1)培养6、12、24、48h,CCK-8法检测各组细胞生存率;选出顺铂的最佳作用浓度6μmol L-1和作用时间24h。 Hep-2喉癌细胞随机分为空白对照组及白藜芦醇组(终浓度分别为10、30、50和70μmol L-1)培养6、12、24、48h,CCK-8法检测各组细胞生存率;选出最佳作用浓度50μmol L-1和作用时间24h。(2)Hep-2喉癌细胞株经培养后随机分为空白对照组、顺铂组、白藜芦醇组、sirtinol组、顺铂+白藜芦醇组、白藜芦醇+sirtinol组、顺铂+sirtinol组和顺铂+白藜芦醇+sirtinol组。CCK-8法检测各组细胞生存率;采用细胞免疫荧光法观察各组细胞中Sirt1蛋白的表达;AnnexinV-FITC Kit法检测各组细胞凋亡率;RT-PCR法检测各组细胞中Sirt1mRNA水平。结果:CCK-8检测,与空白对照组比较,顺铂浓度为6μmol L-1作用时间为24h时细胞生存率明显下降(P<0.01),白藜芦醇浓度为50μmol L-1作用时间为24h时细胞生存率明显下降(P<0.01);与空白对照组比较,顺铂组和白藜芦醇组细胞生存率明显下降(P<0.01);与顺铂组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞生存率明显下降(P<0.01);与顺铂+白藜芦醇+sirtinol组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞生存率明显下降(P<0.05)。细胞免疫荧光法检测,与顺铂组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞中Sirt1蛋白的平均免疫荧光强度明显升高(P<0.01);与顺铂+白藜芦醇+sirtinol组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞中Sirt1蛋白的平均免疫荧光强度明显升高(P<0.01)。Annexin V-FITC Kit检测,与顺铂组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞凋亡率均明显增加(P<0.01);与顺铂+白藜芦醇+sirtinol组比较,顺铂+白藜芦醇组细胞凋亡率明显增加(P<0.01);RT-PCR检测,与空白对照组比较,白藜芦醇组、顺铂组、顺铂+白藜芦醇组细胞中Sirt1mRNA水平明显升高(P<0.01)。与顺铂+白藜芦醇组比较,白藜芦醇组、顺铂组细胞中Sirt1mRNA水平明显降低(P<0.01)。顺铂+白藜芦醇组细胞中Sirt1mRNA水平比顺铂组高约0.94倍,比白藜芦醇组高约1.82倍。结论:(1)顺铂和白藜芦醇能够诱导Hep-2细胞凋亡。顺铂和白藜芦醇对Hep-2细胞的生长抑制作用呈浓度及时间依赖性。(2)顺铂和白藜芦醇显著提高Hep-2细胞中的Sirt1蛋白的表达及Sirt1mRNA的水平。(3)白藜芦醇提高Hep-2喉癌细胞株对顺铂的敏感性,其机制可能与提高喉癌细胞中Sirt1蛋白表达有关系联。
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