罗布麻愈伤组织和毛状根培养体系建立的初步研究

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罗布麻(Apocynum venetum L.)是我国荒漠区兼具经济和药用价值的珍贵野生资源,在新疆分布最广、品质最佳,其基因组中蕴藏着大量优异的抗逆基因。为了开发和利用其优良的抗逆基因,成熟的组织培养体系和遗传转化体系是前提条件。因此,本文从新疆罗布麻愈伤组织的诱导、悬浮细胞培养、毛状根的诱导及其扩大培养等方面进行了研究。主要研究结果如下:在MS、B5、IS、WPM四种培养基中分别附加0.5 mg·L-1 2,4-D+0.05 mg·L-16-BA,茎段和叶片的愈伤诱导率均为100%。同时发现,将接种于WPM上的叶片培养在光照下诱导的愈伤组织状态最佳,质地疏松、生长快。得出适合罗布麻初始愈伤组织诱导的培养体系为:叶片外植体光照培养在WPM固体培养基上。分析10 g·L-1~50 g·L-1的接种量对罗布麻悬浮细胞生长量的影响,发现生物量积累最大的接种量为30 g·L-1。以30 g·L-1的最佳接种量分析了在一个生长周期内悬浮细胞的生长情况,发现悬浮细胞生长曲线类似“S”型,前9天活力逐渐增加,到第9天时活力达到最大值;同时9~15天内鲜重呈指数增长趋势。得出罗布麻细胞悬浮培养的接种量为30 g·L-1、适宜的继代周期为15天左右。利用发根农杆菌AC1090和AC1060侵染罗布麻茎段外植体,其中,AC1090发根诱导率为69.17%。从形态和分子水平验证其为毛状根。分析4 g·L-1~12 g·L-1的接种量对罗布麻毛状根生长量的影响,发现生物量积累最大的接种量为6 g·L-1。以6 g·L-1的最佳接种量分析了在一个生长周期内毛状根液体培养的生长情况,发现100 m L摇瓶和3L生物反应器中毛状根的生长量均呈“S”型,第10天进入指数增长期,20天进入平台期。得出罗布麻毛状根液体培养的接种量为6 g·L-1、适宜的继代周期为20天左右。对比分析罗布麻悬浮细胞、毛状根、大田根和组培苗实生根的总黄酮含量和抗氧化性分析发现,黄酮含量毛状根>悬浮细胞>大田根>组培苗实生根;DPPH和FRAP法的抗氧化能力依次为毛状根>大田根>组培苗实生根>悬浮细胞。
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