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第一部分雷公藤红素对胆管癌细胞增殖和细胞周期的影响目的：观察雷公藤红素对人胆管癌细胞株TFK-1细胞生长抑制情况及对细胞周期的影响。方法：采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)测定不同浓度的雷公藤红素干预后,胆管癌细胞株TFK-1在24h、48h、72h时间段的活力和增殖变化,计算生长抑制率及IC50；雷公藤红素孵育TFK-1细胞不同时间段后,进行PI染色,用流式细胞仪测定细胞周期改变,并观察有无出现凋亡峰。结果：1.雷公藤红素对TFK-1细胞生长的抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性,细胞活力和增殖能力随着孵育时间延长和剂量增加而逐渐下降,三个时间段的IC50分别为3.67μg/ml(24h)、1.98μg/ml (48h)、1.33μg/ml(72h);2.雷公藤红素干预后,细胞周期出现明显改变,24h即可见G2/M期阻滞,72h后最为明显,但并未出现Sub-G1峰。结论：1.雷公藤红素可在体外抑制TFK-1细胞生长,并具有明显的时间、剂量依赖性；2.雷公藤红素可以显著调控TFK-1细胞周期,其中G2/M期阻滞最为显著,在延长孵育时间后,效果可获增强。第二部分雷公藤红素对胆管癌细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响目的：观察雷公藤红素对人胆管癌细胞株TFK-1细胞凋亡的影响,并测定体外药物干预后细胞凋亡相关蛋白(Apoptosis-related proteins)表达变化,初步探讨雷公藤红素抑制TFK-1细胞生长的可能机制。方法：采用Annexin V-FITC/PI双染法对雷公藤红素(2μg/ml)干预不同时间段(24h、48h和72h)后的TFK-1细胞进行染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；雷公藤红素孵育TFK-1细胞48h后,提取细胞总蛋白,采用Western Blot测定细胞凋亡相关蛋白表达改变。结果：1Annexin V-FITC/PI双染结果提示,雷公藤红素干预后TFK-1细胞出现凋亡,呈时间依赖性,72h凋亡率可达56.01%,早凋多于晚凋：2Western Blot检测显示凋亡蛋白抑制因子Survivin及Bcl-2农达下调,促凋亡蛋白Bax及Caspase-3表达上调。结论：1.雷公藤红素可以诱导TFK-1细胞凋亡,并呈时效关系；2.雷公藤红素通过Caspase依赖的线粒体途径诱导TFK-1细胞凋亡,其机制与下调Survivin及Bcl-2蛋白表达,和上调Bax及Caspase-3蛋白表达密切相关。第三部分雷公藤红素对胆管癌荷瘤鼠抗肿瘤作用及机制初探目的：观察雷公藤红素对胆管癌荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用,并测定体内药物干预后移植瘤中凋亡相关蛋白表达情况,进一步探讨雷公藤红素抗胆管癌作用的可能机制。方法：建立胆管癌的裸鼠皮下移植瘤模型,经腹腔注射雷公藤红素(1,2mg/kg/day)后定期测量荷瘤鼠的肿瘤体积变化及体重改变,计算肿瘤生长抑制率；给药结束后处死荷瘤鼠,提取肿瘤组织蛋白,经Western Blot测定凋亡相关蛋白表达情况。结果：1.在体内,雷公藤红素2个浓度组均表现出抑制肿瘤生长的作用,高剂量组更为显著(p<0.01),抑瘤率可达49.71%；两个剂量组均未出现药物相关的裸鼠死亡,但高剂量组出现荷瘤鼠体重下降、腹泻现象；2.药物干预后体内凋亡相关蛋白表达情况与体外一致,Survivin及Bcl-2表达受抑,Bax及Caspase-3表达上调,并呈现出明显的剂量依赖关系。结论：1.雷公藤红素可以显著抑制体内肿瘤生长,并呈现明显的量效关系,但高剂量可以出现一定毒副作用,其安全性有待进一步评估；2.雷公藤红素可在体内外通过调节凋亡相关蛋白表达水平来诱导TFK-1细胞凋亡,可能经由NF-κB信号传导通路发挥其抗肿瘤作用,是一种颇具研发前景的分子靶向抗胆管癌候选药物。