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目的1.采用气管给药制造大鼠肺间质纤维化模型；2.观察CKLFl-C19多肽及氢化可的松琥珀酸钠对博莱霉素致肺纤维化大鼠的治疗作用；3.探讨CKLFl-C19多肽及氢化可的松琥珀酸钠对大鼠肺间质纤维化模型肺组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)含量的影响；4.对比CKLFl-C19多肽与氢化可的松琥珀酸钠对大鼠肺间质纤维化模型肺组织细胞形态学及肺组织中TNF-α、TGF-β1蛋白含量的影响差异。方法健康Wistar大鼠60只,雄性,体重(200±20)g,实验大鼠随机分为4组,即对照组、模型组、CKLFl-C19多肽组及激素组各15只。用10%水合氯醛(3m1.kg-1)腹腔注射麻醉大鼠,将其头和四肢固定后,采用气管给药法制造肺纤维化模型,方法如下：用开口器撬开口腔,拉出舌,在额镜直视下,趁大鼠吸气的瞬间,迅速将与1ml注射器相连的硬脊膜外麻醉导管插入气管内约1～2厘米,见到导管内液面随大鼠呼吸而波动后,向模型组、CKLFl-C19多肽组及激素组的大鼠气管内一次性注入0.4%博莱霉素0.25mL (5mg.kg-1),同时对照组注入生理盐水0.25ml作为阴性对照,注药后立即将大鼠直立并左右旋转,使药液在肺内分布均匀。造模后第二天开始,对照组与模型组每天给予生理盐水(2mL/只)灌胃,CKLFl-C19多肽组给予CKLFl-C19多肽(100μ g)腹腔注射,激素组给予氢化可的松琥珀酸钠(25mg/g)腹腔注射干预。每天观察各组动物的一般情况(体型、精神状态、皮毛、摄食、活动、粪便等)并称重。在给药后的第7、14、28天采用腹主动脉放血法将各组大鼠分别处死5只,打开胸腔后,分离并取出肺组织,观察各组大鼠双肺外观情况后称重,将左肺浸于10%中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,评价肺泡炎及肺纤维化程度,并采用免疫组化法测定肺组织中TGF-β1的含量。取右肺,用冷生理盐水洗去浮血,在冰浴上剪成碎块,制成10%肺匀浆,3000r.min-1离心10min后取上清液放置于-80℃冰箱中保存,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定TNF-α的含量。结果1.大鼠的一般情况：正常对照组大鼠反应灵敏,体格肥壮,皮毛光亮、致密,摄食正常。模型组大鼠均有不同程度的咳嗽和呼吸困难,摄食减少,体重下降,精神差,活动明显减少,皮毛晦暗,无光泽。CKLF1-C19多肽组前期表现类似模型组,给药7天后有所好转,治疗14天后明显好转,精神状态转好,食欲及活动量较前均有所增加。激素组大鼠表现与CKLF1-C19多肽组无明显差异。2.肺组织大体病理变化：对照组大鼠双肺外观正常,肺叶饱满,呈粉红色,表面光滑,弹性良好。模型组第7天双肺体积增大,呈暗红色,表面可见散在点状出血；14天双肺体积较前缩小,弹性差,除散在点状出血点外,还可见大小不等的散在灰白色结节；第28天双肺体积较前明显缩小,呈灰白色,弹性差且硬度增加,可见大量灰白色结节。CKLF1-C19多肽组部分肺叶表面光滑,呈暗红色,部分局部见大小不等的灰白色结节,部分边缘有散在出血点,部分肺叶体积缩小,硬度增加。激素组与CKLF1-C19多肽组相似。3.肺系数的比较：模型组、CKLF1-C19多肽组、激素组第7、14天和28天时肺系数均显著大于对照组(P<0.05), CKLF1-C19多肽组、激素第7、14、28时肺系数均小于模型组(P<0.05), CKLF1-C19多肽组与激素组无明显差异。4.病理切片肺泡炎和肺纤维化程度的比较：对照组大鼠肺组织大多数结构清晰,各观察时间点均未出现明显的形态学改变。模型组第7天可见明显炎症改变,以巨噬细胞、淋巴细胞为主的大量炎性细胞浸润,成纤维细胞增多,伴有肺泡隔增宽；第14天时可见大量炎性细胞浸润,肺泡间隔明显增宽,肺泡变形,伴有成纤维细胞、平滑肌细胞增殖及胶原纤维沉积；28天时肺部广泛纤维化,肺泡间隔继续增宽,肺泡腔明显缩小,大部分肺泡消失,细胞成分减少,肺间质被胶原纤维和成纤维细胞替代,纤维成分增多较前更为明显,但肺部炎性细胞浸润有所减轻。CKLF1-C19多肽组和激素组各时间点的肺泡炎程度与模型组比均明显减轻(P<0.05),28天时同对照组比较已无统计学意义(P>0.05)。肺纤维化程度与与模型组比较也有所减轻,28天时肺纤维化的缓解程度较模型组有所减缓,但较对照组仍较严重。CKLF1-C19多肽组和激素组肺泡炎及纤维化程度在各观察点比较差别不大(P>0.05)。5.肺组织中TNF-α、TGF-β1含量变化：模型组、CKLF1-C19多肽组及激素组肺组织匀浆中TNF-α含量明显高于对照组(P<0.05), CKLF1-C19多肽组和激素组低于模型组(P<0.05),而CKLF1-C19多肽组和激素组无明显差异；第7到第28天,模型组、CKLF1-C19多肽组及激素组大鼠肺组织TNF-α含量有递减趋势。TGF-β1蛋白在对照组表达弱阳性,仅在少数细支气管黏膜上皮细胞的胞浆中出现,模型对照组TGF-β1的表达在第14天时为最强,随时间推移呈递减趋势,主要位于肺泡巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞的胞浆中。CKLF1-C19多肽组和激素组第14、28天肺组织中TGF-β1的表达均低于模型组(P<0.05), CKLF1-C19多肽组和激素组的差异无统计学意义。结论1. CKLF1-C19多肽和氢化可的松琥珀酸钠对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化有一定的治疗作用；2. CKLF1-C19多肽和氢化可的松琥珀酸钠可能部分通过降低TNF-α、TGF-β1的含量抑制博莱霉素致肺部炎症及肺纤维化的发展。3. CKLF1-C19多肽与氢化可的松琥珀酸钠治疗对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎与肺纤维化的疗效无明显差异。