拟南芥铁离子转运蛋白调控因子的突变体库的构建和筛选

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铁是植物生长发育所必须的元素之一,目前已有许多关于铁的吸收、转运和利用等方面的报道。植物铁离子转运蛋白在植物耐低铁胁迫中起着重要的作用,关于其转录和转录后调控目前了解还比较少,本研究所使用的材料是遗传所凌宏清实验组所特有的拟南芥双过量表达FIT和AtbHLH38株系0x29/38,我们利用此材料去分离调控IRT1基因表达的新的基因,试图去填补国际上这块研究空白,更加完善该基因的调控网络。本研究以FIT/bHLH38双过量转基因植株(0x29/38)为材料,建立EMS突变体库。利用0x29/38株系在缺铁条件下没有黄化表型这一特点,在1/2MS-Fe固体培养基上对诱变植株的M2代植株进行缺铁处理,挑选出有黄化表型的植株为候选植株。将M3代能稳定遗传黄化表型的植株定为候选突变体。本实验最终获得了4个候选突变体株系Ox29/38-20、Ox29/38-29、Ox29/38-31和0x29/38-2-4,并对这四个候选突变体进行了表型和分子鉴定,并对目地基因进行了初定位。综合表型和分子鉴定的结果,本研究认为0x29/38-20和0x29/38-29是本实验的目地突变体,因为这两个突变体中IRT1蛋白分别在正常(0x29/38-20和0x29/38-29)和缺铁(仅0x29/38-20)条件下都下调表达,而且目地基因是在蛋白水平调控IRT1蛋白的表达,因为转录水平其表达在两个突变体中都没变化。
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