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随着渔业资源的衰退和水产养殖产业的迅速发展,鱼粉供需矛盾加剧,寻找合适的鱼粉替代蛋白源是水产养殖业的热点问题之一。豆粕是一种比较理想的鱼粉替代蛋白源,然而高比例豆粕替代饲料中鱼粉会破坏肠道结构,诱发肠道炎症,影响鱼体生长。本文以黄姑鱼(Nibea albiflora)为研究对象,研究高比例豆粕替代鱼粉后添加三丁酸甘油酯(TB)对黄姑鱼生长、肠道结构及肠道健康的影响。实验设计6组等氮(50%)等脂(12%)饲料:以42%鱼粉含量的饲料为阳性对照组(FM组),以豆粕替代40%鱼粉蛋白的饲料组为阴性对照组(SBM组),然后在SBM组基础上分别添加0.05%,0.1%,0.2%,0.4%三丁酸甘油酯作为实验组(TB0.05组,TB0.1组,TB0.2组,TB0.4组)。鱼体初重(9.00±0.05g),养殖8周。实验结果如下:1.三丁酸甘油酯对黄姑鱼生长指标和体成分的影响各组的成活率(SR)无显著差异(P>0.05)。FM组的终末体重(FBW)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和饲料效率(FER)均显著高于SBM组(P<0.05)。TB0.1组的FBW、WGR、SGR和FER显著高于SBM组(P<0.05),且与FM组无显著差异(P>0.05)。随着三丁酸甘油酯添加水平的提升,黄姑鱼摄食量呈下降趋势,TB0.4组的摄食量显著低于SBM组和TB0.05组(P<0.05)。随着三丁酸甘油酯添加水平的增加,黄姑鱼饲料效率先升高后下降,TB0.1组显著高于SBM组(P<0.05),与FM组无显著差异(P>0.05)。在豆粕蛋白替代40%鱼粉蛋白条件下,添加0.1%三丁酸甘油酯效果最佳。后续实验主要分析FM组、SBM组和TB0.1组。实验发现,各组黄姑鱼的粗蛋白,粗灰分及水分含量均无显著性差异(P>0.05),但SBM组和TB0.1组的粗脂肪含量显著低于FM组(P<0.05)。各组黄姑鱼肌肉∑n-6 PUFA,∑n-3 LC-PUFA的值均无显著性差异(P>0.05),但FM组∑n-3 PUFA,∑n-3/n-6PUFA显著高于SBM组和TB0.1组(P<0.05)。TB0.1组肌肉必需氨基酸组氨酸(His)和精氨酸(Arg)含量显著高于SBM组(P<0.05),但与FM组无显著差异(P>0.05)。2.三丁酸甘油酯对黄姑鱼后肠道结构的影响FM组和TB0.1组的肠皱襞高度显著高于SBM组(P<0.05),但FM组与TB0.1组之间无显著差异(P>0.05)。三组饲料处理的黄姑鱼的肌层厚度无显著性差异(P>0.05)。FM组的绒毛周长比显著高于SBM组(P<0.05),TB0.1组和其它两组均无显著性差异(P<0.05)。FM组的肠道微绒毛高度显著高于SBM组和TB0.1组(P<0.05),且TB0.1组显著高于SBM组(P<0.05)。FM组的肠道微绒毛密度显著高于SBM组和TB0.1组(P<0.05),且TB0.1组显著高于SBM组(P<0.05)。养殖实验结束后取黄姑鱼后肠研究肠道结构相关基因表达,荧光定量PCR(RT-qPCR)数据显示,SBM组Claudin3,Claudin4和ZO1的表达水平都显著低于FM组(P<0.05)。TB的添加提高SBM组的紧密连接相关基因的表达,Claudin3,Claudin4,JAM1,ZO1的表达水平都显著高于SBM组(P<0.05)。3.三丁酸甘油酯对黄姑鱼后肠道健康的影响实验结束后取黄姑鱼后肠研究免疫相关基因表达,荧光定量PCR(RT-qPCR)数据表明,SBM组促炎细胞因子TNFα,IL1β,SOCS3表达水平显著高于FM组(P<0.05),TB0.1组的IL1β表达水平显著低于SBM组(P<0.05)。收集摄食后6h黄姑鱼后肠粪便进行微生物分析,发现SBM组Observed species、Chao1指数显著低于FM组与TB0.1组(P<0.05)。这表明SBM替代鱼粉后肠道微生物种类显著减少,但饲料中添加TB可以显著改善这一状况。PCoA结果显示,FM组和TB0.1组位置相近,SBM组分布较为分散。在门水平上,各组黄姑鱼后肠道优势菌群均为变形菌门、厚壁菌门、放线菌门、蓝菌门、拟杆菌门、酸杆菌门。FM组和TB0.1组的放线菌门和酸杆菌门丰度显著高于SBM组(P<0.05)。在纲水平上,各组黄姑鱼后肠道优势菌群α-变形菌纲、β-变形菌纲、γ-变形菌纲。FM组的α-变形菌纲显著高于SBM组和TB0.1组(P<0.05),且TB0.1组的α-变形菌纲显著高于SBM组(P<0.05)。FM组和TB0.1组的γ-变形菌纲显著低于SBM组(P<0.05)。在属水平上,TB0.1组条件致病菌属不动杆菌属显著低于SBM组(P<0.05),与FM组无显著差异(P>0.05)。TB0.1组可降解有机物的菌属(氢噬胞菌属、甲基对硫磷降解菌、德沃斯氏菌属、红环菌属及Methyloversatilis)显著高于SBM组(P<0.05),与FM组无显著差异(P>0.05)。三丁酸甘油酯可以丰富SBM组肠道菌群多样性,降低条件致病菌属丰度,提升降解有机物功能菌属丰度,改善肠道健康。