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甘油二酯酰基转移酶(DGAT1)是控制甘油三脂合成的关键酶。研究发现奶牛DGAT1基因外显子8中发生了一个由AA到GC的双核苷酸非保守替换突变,其导致DGAT1第232位的赖氨酸变为丙氨酸,从而导致了一个K232A位点的多态性,进一步研究表明该位点对荷斯坦牛产奶性状尤其是乳脂量有显著影响。因此,DGAT1基因是产奶性状的一个重要候选功能基因。
本研究根据DGAT1基因外显子8的AA/GC突变导致CfrI限制性酶切位点出现的原理,针对AA/GC突变位点设计了一对引物,特异性扩增奶牛DGAT1基因含有上述点突变的片段,建立了一种准确判定奶牛DGAT1基因型的.PCR-RFLP方法。PCR扩增产物长度为201bp,经限制性内切酶CfrI酶切后,结果出现三种基因型:201bp:201bp,178bp,23bp和178bp,23bp,分别命名为KK、KA和AA。
应用该PCR-RFLP方法对北京郊区14个奶牛场的1222头中国荷斯坦牛的DGAT1基因进行了基因型检测分析,发现KK、KA和AA三种基因型的频率分别为0.1432、0.6097和0.2471;采用动物模型对数据进行拟合,通过SAS(8.2)MIXED过程对奶牛产奶性状和DGAT1基因型进行关联分析。结果表明:不同基因型之间的305天产奶量、乳脂量、乳蛋白量差异显著(P<0.01),AA基因型产奶量高于KA基因型(P<0.01),KA基因型产奶量高于KK型(P<0.01);KK基因型乳脂量高于KA基因型(P<0.01),KA基因型高于AA基因型(P<0.01);AA基因型乳蛋白量高于KA和KK基因型(P<0.01)。305天产奶量、乳脂量和乳蛋白量的基因替代平均效应分别为-248.739kg、11.882kg和-5.158kg,均达到极显著水平(P<0.01)。
本研究结果表明DGAT1基因对奶牛产奶性状具有重要影响,可以作为中国荷斯坦牛305天产奶量、乳脂量和乳蛋白量性状标记辅助选择的遗传标记。