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目的采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)分析-生物信息学-质谱多反应检测(multiple reaction monitoring,MRM)技术的联合策略,筛选并验证低级别膀胱尿路上皮癌(low grade bladder urothelial carcinoma,LBUC)的特异性尿液差异蛋白;应用Meta分析整合其他科研小组获得的BUC尿液差异蛋白,构建BUC尿液差异蛋白数据集;确定单一候选差异蛋白用于LBUC判别模型的应用标准并验证。方法分别收集健康志愿者和经病理检测确诊为LBUC患者的术前尿液标本,按比例混合后获得对照组(N组)和LBUC组(L组)的混合尿液标本各两例,采用i TRAQ技术对各组尿液标本进行蛋白质组标志物定量表达谱分析,找出两组间的尿液差异蛋白;经基因本体论(Gene Ontology,GO)分析和蛋白Pathway分析,挑选出与BUC发生发展、浸润转移相关的差异蛋白。应用MRM技术在N组和L组尿液(每组各5例独立标本)中验证上述蛋白,最终获得可信的LBUC尿液差异蛋白。利用“膀胱癌”和“尿蛋白”等系列关键词检索在线中英文数据库,收集符合要求的与膀胱癌诊断检测相关的尿蛋白标志物,通过Meta分析,整合其他研究小组发现的BUC尿液差异蛋白,并结合本研究中筛选并验证获得的尿液差异蛋白,共同组建BUC尿液差异蛋白数据集。搜索STRING数据库(主页:https://string-db.org/),对数据集中的所有蛋白进行蛋白相互作用分析,进一步选择某单一蛋白作为候选差异蛋白,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测其在L组(48例)和N组(36例)尿液标本中的表达水平,应用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线确定其对LBUC判别诊断的最佳工作点(optimal operating point,OPP),计算相应的特异度和灵敏度。结果1应用i TRAQ技术共鉴定出1842个蛋白。与对照组比较,LBUC组有145个蛋白表达变化大于1.2倍,包括表达上调的蛋白41个,表达下调的蛋白104个。生物信息学分析结果显示,差异蛋白主要与细胞增殖、信号传导、代谢等多方面功能有关。2在表达差异大于1.5倍的67个备选尿液蛋白中,选择16个备选差异蛋白进行MRM验证,成功检测到其中的11个差异蛋白,其中4种蛋白包括α1-抗胰蛋白酶(alpha-1-antitrypsin,A1AT)、载脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)、α2-巨球蛋白(alpha-2-macroglobulin,A2MG or A2M)、载脂蛋白A-IV(Apolipoprotein A-IV,APOA4)在LBUC组中表达上调,7种蛋白包括磷脂酶D3(Phospholipase D3,PLD3)、甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶2(mannose associated serine protease 2,MASP2)、4F2细胞表面抗原重链(cellsurface antigen heavy chain,4F2)、腓骨蛋白2(fibulin 2,FBLN2)、基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1,SDF1)、黑色素瘤抑制活性蛋白3(melanoma inhibitory activity member 3,MIA3)和磷酸组氨酸磷酸酶(phosphohistidine phosphatase 14k Da,PHP14)在LBUC组中表达下调。3应用Meta分析整合国内外已发现的BUC尿液差异蛋白,获得了3种尿液差异蛋白,包括A1AT、血管生成素(angiogenin,ANG)和载脂蛋白A-I(apolipoprotein AI,APOA1),与本研究中筛选及验证的11种尿液差异蛋白共同构建BUC尿液差异蛋白数据集,共13个尿液差异蛋白。4采用ELISA检测尿液中APOE的表达并根据结果绘制ROC曲线后,发现以0.45 pg/ml作为临界点,可将LBUC患者与健康对照组进行较好的区分,灵敏度为81.25%,特异度为88.9%。结论1应用i TRAQ-生物信息学-MRM技术筛选及验证了11种LBUC尿液差异蛋白。2应用Meta分析整合国内外已发现的BUC尿液差异蛋白获得了3种尿液差异蛋白,共同构建BUC尿液差异蛋白数据集,包括A1AT、APOE、A2MG、APOA4、ANG、APOA1、PLD3、MASP2、4F2、FBLN2、SDF1、MIA3和PHP14,共13个尿液差异蛋白。3尿液差异蛋白APOE在LBUC诊断中具有潜在的临床应用价值。图14幅;表17个;参123篇。