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近年来的研究表明,氯化血红素(Hemin)作为血红素加氧酶-1(HO-1)的诱导剂,通过提高植物中HO-1的表达和蛋白含量可以促进黄瓜和番茄幼苗不定根的分化、侧根的形成,可以提高植物抵御非生物胁迫的能力,一氧化氮(NO)作为一种气体信号分子在这些过程中与HO-1会有相互作用。此外,从动物血液中提取加工而来的Hemin是较好的补铁剂,广泛应用于食品加工和医疗领域,但有关Hemin作为一种安全无毒的外源添加物提高芽苗菜营养品质的研究还较少。萝卜芽苗菜因富含多种营养物质深受欢迎,花青苷便是其中一种有还原性作用的次级代谢物,对人体健康有益,在植物遭遇UV胁迫、盐胁迫等非生物胁迫时也会大量积累,提高植物的胁迫适应性。本文以‘杨花萝卜’为试验材料,通过外源添加Hemin提高HO-1的表达量和蛋白含量,探究HO-1对萝卜芽苗菜下胚轴花青苷积累的影响,及NO在此过程中的作用。本文主要研究结果如下: 1、与对照添加去离子水培养‘杨花萝卜’相比,添加10μmol·L-1 Hemin的可显著提高芽苗下胚轴花青苷含量和血红素加氧酶-1的蛋白含量及HO-1表达量。通过添加血红素加氧酶-1的催化产物(BR、Fe2+、CORM3)和抑制剂(ZnPP)进一步探究氯化血红素对花青苷积累的促进作用是否通过血红素加氧酶-1。经过筛选得到这些物质的最适使用浓度分别为10μmol·L-1 BR、10μmol·L-1 CORM3、10μmol·L-1 Fe2+、100μmol·L-1 ZnPP,检测不同处理下花青苷含量,结果表明Hemin处理下花青苷含量显著高于对照,该现象被血红素加氧酶-1的抑制剂ZnPP显著抑制,BR、Fe2+、CORM3处理下花青苷含量也低于对照。检测花青苷合成过程关键酶活性和相关基因表达量发现,Hemin可以显著提高PAL、CHI酶活性以及结构基因PAL、CHI、CHS、DFR、ANS、F3H和调控基因PAP1、PAP2的表达量,ZnPP显著抑制酶活性和基因表达。因此说明,外源添加Hemin可以通过提高萝卜芽苗菜下胚轴中HO-1含量,进而提高花青苷合成过程中关键酶活性、结构基因和调控基因的表达,促进花青苷积累。 2、探究NO是否在Hemin诱导的‘杨花萝卜’芽苗菜下胚轴花青苷积累过程中发挥作用。结果表明,200μmol·L-1 SNP处理下芽苗下胚轴花青苷含量显著高于对照,而200μmol·L-1PTIO显著抑制花青苷积累,说明提高NO含量可以促进花青苷积累。进一步探究发现Hemin对花青苷积累的诱导作用在Hemin+PTIO处理下被逆转,而ZnPP+SNP处理下花青苷含量高于ZnPP单独处理,同时检测不同处理下花青苷合成过程8个结构基因PAL、 CHI、CHS、DFR、ANS、F3H、UF3GT、LDOX和两个调控基因PAP1、PAP2的表达量,结果表明PAL、CHS、F3H、ANS、UF3GT和PAP1表达量的变化与不同处理下花青苷含量变化相一致。检测不同处理下芽苗下胚轴NO含量变化,发现与花青苷变化相一致,同时检测催化NO生成的NR和NOS酶活性及基因表达量,发现NR酶与‘杨花萝卜’NO产生关系密切。因此认为,NO可能位于HO-1的下游在Hemin诱导的萝卜芽苗菜下胚轴花青苷积累中发挥作用。