超声波/微波复合萃取及酶法前处理对两种薰衣草中生物活性成分分离的研究

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首次借助超声波/微波辅助技术(US/MIC)从L.pubescens(Lp)和L.angustifolia(La)两种薰衣草中分离得到生物活性物质。进而将La精油(La.EO)与乳清分离蛋白结合制备生物纳米胶囊。研究中采用多种方法提取生物活性成分,包括超声波、微波辐射以及超声波-微波复合萃取技术。采用三种方法从Lp中提取薰衣草多酚原油(Lp.PCE),包括超声波-微波复合萃取法(超声波40 kHz,50 W;微波480 W,5 min),超声波均质萃取法(20 kHz,150 W,5 min)处理样品以及用作对照的传统浸渍法。采用福林酚试剂法测定总酚含量(TPC),即没食子酸当量(mg)与相应干物质量(g)比值。采用DPPH和β-胡萝卜素/亚油酸脱色技术测定Lp.PCE的抗自由基活性。通过添加Lp.PCE及与其具有协同作用的柠檬酸(CA),根据腐败变质试验测定经漂白和除臭的棕榈油(RBDPOo)的氧化稳定性。在超声波-微波辅助(US/MIC)处理前采用酶对样品进行前处理,实现高效分离Lp.EO和La.EO。在响应面软件(RSM)的基础上,采用Box-Behnke模型设计了17组试验,其中液态纤维素酶(CEase)、半纤维素酶(HEase)以及两种酶的混合物(CEase/HEase)用量为10 mg/100 m L,并采用克莱文杰装置提取Lp.EO,验证酶法预处理数据优化结果。采用气相色谱-质谱联用仪(GCMS)分析Lp.EO和La.EO中的化学组分。在酶法处理及US/MIC处理后分别采用SEM观察Lp和La植物组织。采用DPPH·-SA和ABTS·+SA试验测定自由基清除率。为表征Lp.PCE的抗菌效果,研究Lp.EO与La.EO的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌性能。采用La.EO完成包埋试验。制作纳米胶囊时,采用葵花油(SFo)作为载体,乳清分离蛋白(WPI)作为壁材。借助Zetasizer Nano(Malvern仪器,Westborough公司,MA)采用电泳测定法得到纳米胶囊颗粒分布、多分散性指数及电荷特性(Zeta电动电势)。进而采用CLSM、TEM和SEM.观察纳米乳液液滴和纳米胶囊的形态,借助XRD和FTIR分析分析La.EO和WPI的交互作用。研究结果表明,超声波-微波复合萃取法,超声波均质萃取法及传统浸渍法所得Lp.PCE的TPCs含量分别为253.87,216.96和203.41。其中,超声波-微波复合萃取法不仅具有较好的自由基清除效果(DPPH·为90.53%,EC50为19.54μg/mL),还表现出优异的抑制β-胡萝卜素/亚油酸酯乳液劣变效果(抑制率为94.44%,IC50为30.62μg/m L)。氧化稳定性试验结果表明,精炼、漂白、脱臭处理后的鲜棕榈油(RBDPOo)在经超声-微波萃取后诱导期延长至18.82 h,抗氧化稳定指数达到1.67。柠檬酸与Lp提取物在提高鲜榨棕榈油抗氧化稳定性上具有良好的协同增效作用。香芹酚是全部处理品的主要组分,纤维素酶处理品的香芹酚含量高达29.22%。借助扫描电子显微镜(SEM)观察Lp形态结构变化。采用DPPH·-SA和ABTS·+SA试验测定自由基清除率。与对照样(Ctrl)、半纤维素酶(HEase)及两种酶的混合物处理样相比,纤维素酶预处理样品所得产率(%)最佳。最终得到优化分离条件如下:酶浓度为14.82mg/100mL,超声处理时间为38.18 min,微波处理瓦数为333 W。在此条件下,最大产率、DPPH·-SA及ABTS·+SA分别为0.67%、65.40%和0.025 mM Trolox。酶法预处理技术可用来提高植物体中的次级代谢产物释放率,其中基于纤维素酶的酶法辅助预处理技术可以有效提高Lp.EO释放率。这一结果表明,借助US/MIC在最优条件下分离得到的Lp.EO具有良好的自由基清除效果和抗菌效果。在US/MIC处理前采用酶处理样品分离薰衣草精油(EO),同样借助RSM获得最优处理条件。与单一酶处理样品相比,复合酶(纤维素酶和半纤维素酶)处理所得La精油产率(%)相对较高。采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析La.EO中的化学组分。采用SEM分析La组织结构,采用DPPH·和ABTS·+方法分析自由基活性,所得最优分离条件如下:5-20 mg酶浓度处理样中12.5mg最佳,15-90 min声波降解时间中52.5 min最佳,500-50 W微波功率范围中275 W最佳。抗菌试验结果表明,超声波-微波辅助提取产物可以有效对抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。本研究中所用超声波-微波复合萃取技术可有效促进声波气蚀效应和植物组织破裂。这一现象有效促进溶剂进入植物细胞,增强活性成分提取效果,从而提高芳香植物精油分离效率。本研究结果表明在最优条件下采用超声波-微波复合萃取技术得到的La.EO可用做抑制食品氧化和抑制细菌(生长)的食品添加剂。超声波-微波复合萃取可以诱发气蚀效应和植物细胞破裂,促进溶剂进入细胞,增大固态样品提取率,从而显著提升精油提取效果。研究结果还表明,将SFo作为载体,WPI粗提物乳液作为壁材,可成功制备La.EO纳米胶囊。
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