PbrERF24和PbrERF912参与调控梨果实成熟分子机制的初步研究

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梨是中国三大水果之一,产量和栽种面积均居世界第一。大多数梨属于呼吸跃变型果实,在成熟过程中会有大量乙烯的释放。众所周知,乙烯能够促进呼吸跃变型果实的成熟,ERF(乙烯响应因子)是乙烯信号传导途径的最终响应基因。本研究针对我国梨品种熟期不同的特性,以鸭梨和翠冠为试验材料,开展了不同激素及ERF转录因子调控果实成熟的研究,明确了PbrERF24和PbrERF912分别调控鸭梨和翠冠果实成熟过程中乙烯合成的分子路径,并探究了 IAA和ABA对果实发育成熟的影响。主要结果如下:1.研究对梨五个栽培种的成熟果乙烯释放量的差异进行分析后,得出结论,在相同的时间和单重内,西洋梨和秋子梨的乙烯释放量较高,砂梨和白梨次之,新疆梨的乙烯释放量最低。根据其耐贮藏特性的研究,本试验分别从白梨系统和砂梨系统中各选择一个典型的呼吸跃变型品种,即鸭梨和翠冠作为试验材料,来探究乙烯和1-MCP处理对果实成熟的影响。数据结果表明,经1.5 μ1·I-1的1-MCP处理后的鸭梨果实可溶性固形物含量明显下降,此外,300ppm的乙烯处理能够显著促进翠冠果实早熟,这一结论为接下来筛选调控果实成熟的乙烯响应因子的研究提供了理论依据。2.研究将鸭梨的未成熟果PF,成熟果RB和处理果TF三组材料进行转录组测序分析。通过数据结果分析,研究在1-MCP处理诱导的有关果实成熟的73个候选基因中选出了两个与果实成熟相关的基因,乙烯合成基因和乙烯响应基因,在文章中命名为ACO54和ERF24。梨果实瞬时转化实验结果显示,ACO54基因的过表达能够提高ERF24以及多种成熟相关基因的表达,同时ERF24的过表达也能够相应提升ACO54基因以及部分成熟相关基因的表达水平。通过双荧光素酶报告和酵母单杂两个实验,进一步证实了ERF24与ACO54之间的相互作用,揭示了ERF24是白梨上第一个被确认的参与调控果实成熟的乙烯响应因子。3.基于果实发育动态的转录组数据,研究筛选出了一个乙烯生物合成基因ACS688以及另一个乙烯响应因子ERF912。在翠冠果实的乙烯处理组上进行qRT-PCR验证,结果分析表明,ERF912,ACS688以及ACO54与翠冠果实的成熟相关。此外,双荧光素酶报告和酵母单杂实验进一步验证了ERF912与ACO54启动子的互作。这些结果都揭示了乙烯响应因子ERF912参与调控翠冠的成熟调控。4.在以上研究的基础上,研究以翠冠为材料,在果实发育的五个阶段分别使用浓度为 0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L 以及 1000 mg/L 的 IAA 和 ABA 对翠冠进行处理,探究IAA和ABA处理对果实成熟的影响。通过一系列生理指标的测定,结果分析表明,IAA和ABA处理对果实发育成熟有一定的影响,尤其在花后90天左右,五种浓度的IAA和ABA处理都能使果实可溶性固形物的含量上升,且与对照相比差异极显著。
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