论文部分内容阅读
目的： 非酒精性脂肪性肝病是遗传-环境-代谢-应激相关性肝脏疾病。常与肥胖、2型糖尿病、血脂紊乱、高血压等代谢综合征并存。甘油三酯的合成分解对NAFLD起着举足轻重的作用。本研究的目的在于了解新疆维吾尔族、汉族人群NAFLD的患病现况及相关危险因素，并分析NAFLD与相关代谢性疾病之间的关系。探讨PNPLA3、ApoC3以及ApoA5基因多态性与NAFLD的相关性，揭示遗传和环境因素在新疆维、汉两个民族NAFLD发生发展中的作用。肝细胞凋亡及炎症反应在NAFLD发病中具有关键作用，故本研究探讨CK18片段、ADP以及RBP4与NAFLD的相关性，为NAFLD的防治提供科学依据。 方法： 1.本研究连续收集2011年3月至2012年7月在新疆医科大学第一附属医院体检中心参加体检维吾尔族、汉族人群4318例为研究对象进行问卷调查、体格检查及生化指标检测。统计不同民族、不同年龄、不同性别人群的NAFLD患病率，并对 NAFLD相关危险因素进行分析。 2.采用病例-对照研究的方法选择维吾尔族、汉族NAFLD患者各200名为病例组，维吾尔族、汉族健康者各200名为对照组，年龄在20-70岁之间。采用 SNaPshot技术检测NAFLD组及对照组PNPLA3-rs738409，ApoC3-rs2854116和-rs2854117，ApoA5-rs662799和-rs3135506的序列片段，根据其序列片段来确定其基因型。通过Hardy-weinbeurg遗传平衡定律分析维吾尔族、汉族人群各基因型的代表性，基因变异及NAFLD有关的因素间的关系通过卡方检验和Logistic回归分析。采用叉生分析来分析基因与基因、基因与环境的交互作用。 3.采用病例-对照研究的方法选择维吾尔族、汉族NAFLD患者各150名为病例组，维吾尔族、汉族健康者各150名为对照组，年龄在20-70岁之间。采用ELASA方法检测脂肪因子 ADP、RBP4、CK18-M30以及CK18-M65。 结果： 1.维吾尔族和汉族非酒精性脂肪肝患病现况与相关危险因素分析，维吾尔族人群中NAFLD患病率为45.2％；汉族人群NAFLD患病率为36.1%。维吾尔族人群 NAFLD患病率高于汉族（χ2=35.086，P＜0.01）。维吾尔族、汉族人群在50岁之前男性NAFLD患病率高于女性；NAFLD患病率随年龄增长而增加（P＜0.01）。NAFLD组体重指数、腰围、血压、血红蛋白浓度、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血尿酸、血清转氨酶均高于非脂肪肝组（P＜0.001），高密度脂蛋白胆固醇水平低于非脂肪肝组（P＜0.05）；随着体质指数、血尿酸、血红蛋白等级增加，NAFLD的患病率也随着增加。NAFLD组的MS及其组分（肥胖、空腹血糖异常、高血压、血脂异常）患病情况均高于对照组（所有P＜0.05）。而相对于无MS，随着MS组分数目增加，发生NAFLD的患病率也随之增加，并且维吾尔族人群四个MS组分人群发生NAFLD的危险性是无MS组的71.267倍，汉族人群四个MS组分人群发生 NAFLD的危险性是无MS组的109.254倍。多因素Logistic回归分析显示：男性（OR：1.476，95%CI：1.149-1.898，P=0.002）、年龄增加（OR：1.036，95%CI：1.028-1.044，P＜0.001）、维吾尔族（OR：1.337，95%CI：1.114-1.604，P=0.002）、肥胖（OR：5.682，95%CI：4.731-6.823，P＜0.001）、高血压（OR：1.260，95%CI：1.036-1.531，P=0.021）、淋巴细胞计数增加（OR：1.404，95%CI：1.221-1.613，P＜0.001）、血红蛋白浓度增加（OR：1.018，95%CI：1.010-1.026，P＜0.001）、高尿酸血症（OR：3.059，95%CI：2.278-4.107，P＜0.001）、高甘油三酯（OR：2.328，95%CI：1.946-2.786，P＜0.001）、低HDL-C（OR：1.401，95%CI：1.119-1.755，P=0.003）、空腹高血糖（OR：2.004，95%CI：1.496-2.685，P＜0.001）是NAFLD的危险因素。 2.维吾尔族和汉族PNPLA3、ApoC3以及ApoA5基因多态性与NAFLD的相关性，维吾尔族人群PNPLA3-rs738409G等位基因频率分布在NAFLD组（41.63%）与正常对照组（31.12%），差异均有统计学意义（χ2=6.013，P=0.014）。汉族人群 PNPLA3-rs738409G等位基因频率分布在NAFLD组（43.01%）与正常对照组（34.60%）间存在差异且有统计学意义（χ2=9.293，P=0.002），Logistic回归分析显示维吾尔族人群PNPLA3-rs738409GG基因携带者与CC基因携带者相比较，前者发生NAFLD的OR值为2.641（95%CI：1.395-5.001，P=0.003）；汉族人群PNPLA3-rs738409GG基因型携带者与PNPLA3-rs738409GG基因携带者相比较，发生NAFLD的OR值为2.204（95%CI：1.176-4.131，P=0.014）；两民族 NAFLD的多因素logistic回归分析表明 PNPLA3-rs738409GG基因型是NAFLD的危险因素。维吾尔族、汉族人群ApoC3-rs2854116、rs2854117多态性在NAFLD组与对照组的差异均无统计学意义（P＞0.05）。 在维吾尔族 NAFLD组ApoA5-rs662799G等位基因频率高于对照组（χ2=3.203，P=0.045），而在汉族NAFLD组ApoA5-rs3135506 G等位基因频率高于对照组（χ2=4.395，P=0.036）；基因与基因的叉生分析结果表明维吾尔族人群叉生分析结果表明PNPLA3-rs738409与ApoA5-rs3135506、PNPLA3-rs738409与ApoA5-rs662799间存在交互作用，但未发现PNPLA3-rs738409与ApoC3-rs2854116、PNPLA3-rs738409与ApoC3-rs2854117，以及 ApoA5与 ApoC3的四个 SNP位点间存在交互作用。互作图谱仅表明ApoC3-rs2854116与ApoA5-rs3135506存在协同效应，互作效应IG墒为0.29%。汉族人群PNPLA3-rs738409与ApoA5-rs3135506基因间存在交互作用（P=0.014），互作图谱表明PNPLA3-rs738409与ApoA5-rs3135506存在协同效应，互作效应IG墒为0.36%；互作树分析得到PNPLA3-rs738409与ApoA5-rs3135506的距离最近，而PNPLA3与ApoC3基因间相加模型的交互作用分析表明两基因间不存在交互作用（P＞0.05）；互作图谱表明PNPLA3-rs738409与ApoC3-rs2845116、ApoC3-rs2845117互作效应IG墒分别为-0.65和-0.71%。 基因与环境的叉生分析结果表明维吾尔族人群 PNPLA3-rs738409CC与运动型行为方式存在交互作用（OR=0.15）；PNPLA3-rs738409GG基因型与吸烟、糖尿病家族史以及肿瘤家族史存在交互作用（P＜0.05）；ApoA5-rs662799GA基因型与高血压家族史存在交互作用（OR=12.54）；ApoA5-rs3135506GG基因型与高血压家族史存在交互作用（OR=5.09）；汉族人群PNPLA3-rs738409CC与运动型行为方式存在交互作用（OR=0.16）；ApoA5-rs662799GA与高血压家族史存在交互作用（OR=8.31）； 3.维吾尔族和汉族CK18-M30、CK18-M60、ADP以及 RBP4与 NAFLD的相关性，维吾尔族、汉族NAFLD组ADP浓度低于对照组（t维=-19.736，t汉=-17.122，P＜0.001），且ADP与NAFLD呈负相关性；ADP浓度与BMI、空腹血糖、血压、血脂、血尿酸呈负相关性，多元线性回归分析显示维吾尔族人群中BMI、DBP、HDL影响ADP浓度，汉族人群中BMI、TG、LDL影响ADP浓度。维吾尔族、汉族人群NAFLD组RBP4浓度高于对照组（t维=23.006，t汉=13.979，P＜0.001），且RBP4与NAFLD具有正相关性；维吾尔族人群RBP4浓度与BMI、空腹血糖、TG、血尿酸呈正相关性，汉族人群RBP4浓度与BMI、空腹血糖、血压、血脂、血尿酸呈正相关性，多元线性回归分析显示维吾尔族人群中BMI、TG、TC浓度影响RBP4浓度，汉族人群中BMI、TG、SCr浓度影响RBP4浓度，且多因素logistic回归分析显示ADP浓度为NAFLD的保护因素，而 RBP4浓度为 NAFLD的危险因素。维吾尔族、汉族 NAFLD组CK18-M30浓度高于对照组（t维=16.806，t汉=17.747，P＜0.001）；维吾尔族、汉族NAFLD组CK18-M65浓度与对照组差异无统计学意义（t维=-0.549，t汉=-1.421，P＞0.05）；维吾尔族、汉族人群CK18-M30与NAFLD具有正相关性，且CK18-M30浓度为NAFLD的危险因素。维吾尔族、汉族人群CK18-M30浓度与BMI、空腹血糖、血压、血脂、血尿酸、ALT呈正相关性，多元线性回归分析显示维吾尔族人群中BMI浓度影响CK18-M30浓度，汉族人群中HDL、SCr、AST以及ALT浓度影响CK18-M30浓度，且多因素logistic回归分析显示CK18-M30浓度为NAFLD的危险因素。 结论： 不同民族和性别之间的NAFLD患病率存在差异，维吾尔族NAFLD的患病率高于汉族，男性高于女性。NAFLD患病率与糖脂代谢紊乱、血尿酸水平增加、血红蛋白浓度增加关系密切。年龄、维吾尔族、男性、肥胖、高甘油三酯血症、血红蛋白浓度、高尿酸血症是NAFLD的危险因素。NAFLD与肥胖、高血压、高甘油三脂血症、低高密度脂蛋白血症、代谢综合症等代谢性疾病相关，并且是代谢综合症的一个的组成成分。基因多态性研究揭示维吾尔族、汉族PNPLA3-rs738409G等位基因与NAFLD密切相关，ApoC3基因多态性与NAFLD之间尚不存在关联。 维吾尔族ApoA5-rs662799G等位基因与NAFLD密切相关，汉族人群ApoA5-rs3135506G等位基因频率与NAFLD密切相关，同时ApoA5-rs662799 GG基因型与血清甘油三酯升高相关。汉族人群 PNPLA3-rs738409G、ApoA5-rs3135506G与 NAFLD密切相关，这两个多态位点相互作用而参与了NAFLD；而 PNPLA3与 ApoC3基因间未发现交互作用。而维吾尔族人群未发现PNPLA3、ApoC3、ApoA5基因间交互作用。维吾尔族PNPLA3-rs738409GG与吸烟、糖尿病家族史、肿瘤家族史存在交互作用；汉族人群 PNPLA3-rs738409CC与活动型行为方式、ApoA5-rs3135506GG与高血压家族史存在交互作用。 两民族人群ApoA5-rs662799GA、ApoA5-rs3135506GG基因型与高血压家族史存在交互作用；提示对具有高血压家族史、PNPLA3-rs738409GG基因型人群加强NAFLD卫生宣传教育和行为干预具有重要意义。维吾尔族、汉族ADP水平与NAFLD呈负相关，且ADP与BMI、血脂密切相关；RBP4水平与NAFLD呈正相关，且RBP4与BMI、血脂密切相关；揭示ADP、RBP4可能通过影响脂代谢参与NAFLD的形成。维吾尔族和汉族CK18-M30水平与NAFLD呈正相关，且CK18-M30与BMI、ALT、AST关系密切；这证明了CK18-M30与NAFLD密切相关。也进一步证实了肝细胞凋亡与NAFLD的发病机制的关系密切。